[发明专利]一种缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法和应用

权利要求书

1.一种缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，其包括下述步骤：利用高效液相色谱检测供试品溶液即可；

其中，所述供试品溶液为含有缩宫素的水溶液；所述高效液相色谱检测中，采用梯度洗脱方式进行洗脱，流动相A为水相和乙腈的混合液，所述水相为10-150 mmol/L磷酸二氢钠溶液，pH值为4.8~6.5；所述水相与所述乙腈的体积比为（95: 5）~（85: 15）；流动相B为乙腈；

所述流动相A和所述流动相B的梯度洗脱条件如下所述：

上述百分比为流动相A或流动相B的体积与“流动相A和流动相B”总体积之比；

所述三种脱酰胺杂质为[Glu⁴Asp⁵]缩宫素、[Glu⁴]缩宫素和[Asp⁵]缩宫素；

所述[Glu⁴Asp⁵]缩宫素的结构式为Cys-Tyr-Ile-Glu-Asp-Cys-Pro-Leu-Gly-NH₂(1,6二硫键)；

所述[Glu⁴]缩宫素的结构式为Cys-Tyr-Ile-Glu-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH₂(1,6二硫键)；

所述[Asp⁵]缩宫素的结构式为Cys-Tyr-Ile-Gln-Asp-Cys-Pro-Leu-Gly-NH₂(1,6二硫键)；

所述高效液相色谱检测中，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。

2.如权利要求1所述的缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，所述供试品溶液中，缩宫素的浓度为0.002~0.2 mg/mL；

和/或，所述供试品溶液中含有的单个杂质的浓度为0.00002~0.2 mg/mL；

和/或，所述高效液相色谱检测中，色谱柱为Waters Xbridge C₁₈色谱柱。

3.如权利要求2所述的缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，所述供试品溶液中，缩宫素的浓度为0.01~0.1 mg/mL。

4.如权利要求3所述的缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，所述供试品溶液中，缩宫素的浓度为0.02 mg/mL。

5.如权利要求2所述的缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，所述供试品溶液中含有的单个杂质的浓度为0.002~0.1 mg/mL。

6.如权利要求2所述的缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，所述供试品溶液中含有的单个杂质的浓度为0.001 mg/mL。

7.如权利要求1所述的缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱的规格为150mm×4.6mm，5μm。

8.如权利要求1所述的缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，所述流动相A和所述流动相B的梯度洗脱条件如下所述：

。

9.如权利要求1所述的缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件如下所示：

。

10.如权利要求1所述的缩宫素及三种脱酰胺杂质的分离方法，其特征在于，所述水相为80~120 mmol/L磷酸二氢钠溶液；

和/或，所述水相的pH值为5.0~6.0；

和/或，所述水相与所述乙腈的体积比为（92: 8）~（88: 12）；

和/或，所述高效液相色谱检测中，色谱柱柱温为20℃~45℃。