[发明专利]一种狼爪瓦松多糖的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种狼爪瓦松多糖的制备方法及其应用，属于生物技术领域。本发明公开的一种狼爪瓦松多糖的制备方法，以生物反应器培养的狼爪瓦松愈伤组织为主要原料，利用大孔吸附树脂对狼爪瓦松愈伤组织多糖粗提物进行多糖纯化，操作简单、效率高、成本低。本发明制备的狼爪瓦松多糖具有抑菌、抗炎和抗癌活性，能够制备成抑菌药物、抗炎药物和抗癌药物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体的说是涉及一种狼爪瓦松多糖的制备方法及其应用。

背景技术

狼爪瓦松(Orostachys cartilaginous A.Bor)，又名辽瓦松、干滴落，是景天科瓦松属二年生或多年生草本植物。狼爪瓦松多生长于低山山地，在我国主要分布于内蒙古、辽宁、吉林、黑龙江等地。狼爪瓦松具有很高的药用价值，如抑菌、抗癌、抗病毒、抗氧化、降血糖、降血脂等，这与它植物体内含有丰富的多糖类、黄酮类、酚类等多种活性物质密切相关。目前，随着人们对狼爪瓦松需求的增加，过度采集现象严重，造成其野生资源逐年减少，加上人工栽培因成分不稳定等原因，使得狼爪瓦松的开发与应用受到限制。因此，利用生物反应器快速、大量培养狼爪瓦松愈伤组织是缓解狼爪瓦松资源问题的有效途径之一，它作为一种新植物材料源具有潜在的应用价值。

植物多糖作为一种从植物中提取的天然活性物质，大量研究证明其具有抑菌、抗癌、抗炎等生物活性。现已成天然药物学和保健食品学的研究热点，既是寻找天然无毒副作用药物的有效途径，也是保健食品功能因子研究项目之一。因其来源广泛，植物多糖在医药领域具有重要地位。但在应用植物多糖的过程中，由于植物体构造复杂，且具有生物活性化合物在植物体内种类繁多，不同化合物的功能不一，在进行使用时很难实现精准高效的应用，从而造成资源的浪费，因此，需要对不同功能的植物源生物活性物质进行分离与提纯。大孔吸附树脂由于其理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，对有机物选择性好，不受无机盐类及强离子、低分子化合物存在的影响，在水和有机溶剂中可吸附溶剂而膨胀，是20世纪60年代发展起来的新型有机高聚物吸附剂，目前已被广泛应用于天然资源生物活性化合物的纯化和分离，尤其是黄酮类、多酚类、以及多糖类化合物。

高效地提取天然产物被认为是在制药和生化工业中使用绿色技术的一个重要领域，从植物粗提物中纯化生物活性化合物，对天然产物的利用具有特殊的意义，然而含有大量化合物的提取物中纯化理想的化合物是一项极具挑战性的任务。目前已开发出多种化合物的纯化方法，包括超临界流体萃取法、高速逆流色谱法、双水相萃取法、高效液相色谱法等，但这些方法具有复杂、耗时、维护成本高、对环境有害、不适合工业化生产等缺点。

因此，提供一种操作简单、高效率、低成本的狼爪瓦松多糖的制备方法及其应用是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种狼爪瓦松多糖的制备方法及其应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种狼爪瓦松多糖的制备方法，具体步骤如下：

(1)利用生物反应器培养狼爪瓦松愈伤组织，培养后收获，冲洗去除表面培养基，在45℃恒温箱中烘至恒重后收集愈伤组织干品；

(2)制备狼爪瓦松愈伤组织多糖粗提物

将步骤(1)中收集的愈伤组织干品浸泡在料液比为1:15的70％乙醇中，60℃下冷凝回流1h，抽滤，收集滤渣；滤渣再次进行冷凝回流，重复3次；合并滤渣，滤渣表面挥干乙醇后，用100℃热水提取1h，提取三次，每次抽滤的滤液进行合并；将滤液在45℃条件下，减压浓缩，加入乙醇沉淀离心，冷冻干燥，得狼爪瓦松愈伤组织多糖粗提物；

(3)大孔吸附树脂法纯化狼爪瓦松多糖