[发明专利]氧化石墨烯-溶菌酶∕碱性成纤维细胞生长因子复合敷料制备及创面愈合方法

说明书

本发明公开了氧化石墨烯‑溶菌酶/碱性成纤维细胞生长因子复合敷料制备及创面愈合方法，尤其是氧化石墨烯‑溶菌酶/碱性成纤维细胞生长因子复合敷料制备，包括如下步骤：S1准备氧化石墨烯膜：氧化石墨烯膜购买自南京先锋纳米有限公司(货号：100027，CAS号：7440‑44‑0，参数：尺寸:9x9cm厚度：约25微米)；S2制备氧化石墨烯‑多巴胺膜：在100mL去离子水中加入131.14g tris盐酸溶解，得到的tris溶液中加入多巴胺粉200mg，得到tris‑多巴胺溶液，浓度为2mg/mL,pH值为8.5。本发明在成功制备氧化石墨烯‑溶菌酶/碱性成纤维细胞生长因子敷料的基础上，D组样品较好地实现了抗菌作用和促生长作用，对创面愈合有很大的益处。

技术领域

本发明涉及氧化石墨烯技术领域，尤其涉及氧化石墨烯-溶菌酶 /碱性成纤维细胞生长因子复合敷料制备及创面愈合方法。

背景技术

溶菌酶是一种单体蛋白分子，由129个氨基酸残基组成，具有抗炎、抗病毒、杀菌、抗组胺等一系列生物活性。它一直是一种流行的抗菌剂。溶菌酶虽然能够通过在革兰氏阳性菌细胞壁中降解肽聚糖而有效杀死革兰氏阳性菌，但由于溶菌酶不能穿透外膜作用于目标的肽聚糖层，因此对革兰氏阴性菌杀菌作用较弱。溶菌酶的另一个局限性在于其化学结构不稳定且易失活，因此溶菌酶通常以微球囊形式或与其他抗生素联合使用。据报道,各种生长因子(如表皮生长因子、血小板源生长因子,和纤维母细胞生长因子2)可以分别在不同动态阶段发挥关键部分,包括迁移,增殖及血管生成。本文以碱性成纤维细胞生长因子作为模型因子对制备的材料进行修饰，以增强创面愈合效果。由 17kda多肽组成的碱性成纤维细胞生长因子是细胞增殖的主要促进因子，已被广泛应用于创伤愈合和骨折的修复。考虑到碱性成纤维细胞生长因子在正常生理条件下如不稳定可能会快速失活，因此应将其整合到具有水凝胶等缓释功能的给药系统中，以达到更好的利用。因此，氧化石墨烯膜与溶菌酶/碱性成纤维细胞生长因子的综合研究不仅具有广阔的应用前景，而且具有溶菌酶抗菌与碱性成纤维细胞生长因子促生长的联合作用。

近年来，氧化石墨烯在抗菌方面的优异性能引起了越来越多的关注。已有报道基于氧化石墨烯的纳米复合材料在很大程度上有利于伤口愈合，其抗菌性能的根源在于氧化石墨烯边缘所致的细胞膜紊乱及氧化应激诱导之间的协同作用。此外，氧化石墨烯表面含有丰富的羟基、环氧基团、羧基等表面基团，其亲水性和生物相容性明显增强，同时可以被其他化学物质进一步修饰。因此，我们特意对氧化石墨烯实现功能化，以增强其抗菌作用，同时提高其稳定性。目前，为了防止氧化石墨烯的聚集，已经有几例采用化学材料接枝法，其中交联剂的使用包括聚多巴胺、Fe3O4和银纳米颗(AgNPs)，但银纳米颗的细胞毒性值得警惕。

本文成功制备了一系列氧化石墨烯膜-溶菌酶/碱性成纤维细胞生长因子敷料，并在体外对其抗菌性能进行了系统研究。此外，还研究了它们对小鼠创伤愈合的实际作用。所得结果对氧化石墨烯敷料的进一步研究具有指导意义。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了氧化石墨烯膜-溶菌酶/碱性成纤维细胞生长因子复合敷料制备及创面愈合方法。

本发明提出的氧化石墨烯-溶菌酶/碱性成纤维细胞生长因子复合敷料制备，包括如下步骤：

S1准备A组氧化石墨烯膜：氧化石墨烯膜购买自南京先锋纳米有限公司(货号：100027，CAS号：7440-44-0，参数：尺寸:9x9cm厚度：约25微米)；

S2制备氧化石墨烯-多巴胺膜：

S21在100mL去离子水中加入131.14g tris盐酸溶解，得到的tris溶液中加入多巴胺粉200mg，得到tris-多巴胺溶液，浓度为2mg/mL,pH值为8.5；

S22将S1中的氧化石墨烯膜浸泡在上述溶液中12h后，将混合物转移到振动筛中，在37℃下以100r/min的速度振动；

S3制备B组氧化石墨烯-溶菌酶样品：