[发明专利]一种螺旋藻生物活性物质分级分离方法

权利要求书

1.一种螺旋藻生物活性物质分级分离方法，其特征在于，按照顺序依次进行如下步骤：

S1:以螺旋藻粉为原料，提取和纯化螺旋藻粉中的藻蓝蛋白，螺旋藻粉变成一级藻渣；具体步骤如下：

S11:称取螺旋藻粉与磷酸钾缓冲液混合，磷酸钾缓冲液中磷酸钾浓度为0.05-0.08M，二者以克/毫升按照1:10-14混合均匀，于30-42 ºC搅拌或振荡提取1-5 小时；

S12:向上述混合液中加入2-4%质量体积百分数的氯化钙溶液，继续搅拌或振荡抽提1-3h; 质量体积百分数是克/毫升百分数；

S13:离心处理，收集上清液；

S14:加入磷酸钾浓度为0.05-0.08M的磷酸钾缓冲液，重悬沉淀，继续搅拌或振荡抽提1-3 h；

S15:离心处理，收集上清液；

S16:重复至少一次上述步骤S14-S15，以充分提取富含藻蓝蛋白的上清，将每次的上清液合并；将每次的离心沉淀物合并得到一级藻渣；

S17:对合并的上清液进行超滤纯化和浓缩；

S18:干燥，得到高含藻蓝蛋白的粉料，测定其中藻蓝蛋白的含量；

S2:以上述一级藻渣为原料，采用超临界二氧化碳萃取法或有机试剂萃取法提取藻渣中的油脂，并进一步纯化得糖脂，所述一级藻渣变成二级藻渣；具体步骤如下：

S21：以一级藻渣为原料，采用原料质量的0.25-1.0倍的多孔材料与一级藻渣混合均匀后备用；

S22：对所述螺旋藻原料进行超临界CO₂萃取，其中所述超临界CO₂萃取过程中使用有机溶剂作为夹带剂，夹带剂与原料ml/g体积质量比为0.5:1-3:1；

S23:收集萃取物，所述萃取物为来自一级藻渣的油脂；经萃取后产生二级藻渣；

S24：进一步从所述萃取物分离以获得糖脂；

S3:将二级藻渣置于通风条件下，待有机试剂充分挥发干净后，分装保存，二级藻渣中富含蛋白和多糖，作为螺旋藻蛋白和多糖的粗产物。

2.根据权利要求1所述的螺旋藻生物活性物质分级分离方法，其特征在于，所述步骤S1包括：

S11:称取螺旋藻粉与0.06M磷酸钾缓冲液，按克/毫升1:11.5混合均匀，于40 ºC搅拌或振荡提取1-5小时；

磷酸钾缓冲液的配制方法为：配1M 磷酸二氢钾溶液和1M 磷酸氢二钾溶液，以45:55的体积比混合，然后稀释10倍，调节pH=7.0；

S12:向螺旋藻悬液中加入 2.5%质量体积百分数的氯化钙溶液，继续搅拌或振荡10-30分钟；

S13:4500 g离心10 分钟，收集上清；

S14:加入0.06M磷酸钾缓冲液，重悬沉淀，继续搅拌或振荡抽提1小时；

S15:4500 g离心10 分钟，收集上清；

S16:重复上述步骤S14-S15一次，充分提取富含藻蓝蛋白的上清；将每次的上清液合并；将每次的离心沉淀物合并得到一级藻渣；

S17:对合并的上清液进行50 kDa滤膜超滤纯化和浓缩；

S18:干燥，进行藻蓝蛋白含量测定。

3.根据权利要求1所述的螺旋藻生物活性物质分级分离方法，其特征在于，所述步骤S21中，所述多孔材料选自硅藻土、大孔树脂和分子筛中的一种或多种的组合。

4.根据权利要求1所述的螺旋藻生物活性物质分级分离方法，其特征在于，所述步骤S22中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酮、正己烷中的一种或几种。