[发明专利]利用葡萄糖生产天麻素的重组酿酒酵母及其用途在审
| 申请号： | 202010684910.1 | 申请日： | 2020-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN113755354A | 公开（公告）日： | 2021-12-07 |
| 发明（设计）人： | 刘涛;殷华;庄以彬;马延和 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12P17/06;C12R1/865 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 张立娜 |
| 地址： | 300308 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 葡萄糖 生产 天麻 重组 酿酒 酵母 及其 用途 | ||
1.一种构建能够生产天麻素的工程菌株的方法，包括如下步骤(A1)：
(A1)使受体菌表达糖基转移酶AsUGT，所得菌株命名为工程菌1；所述工程菌1为能够生产天麻素的工程菌株；
所述糖基转移酶AsUGT为来源于蛇根木的UDP-葡萄糖基转移酶。
2.一种构建能够生产天麻素的工程菌株的方法，包括如下步骤(A2)：
(A2)使受体菌表达糖基转移酶AsUGT、羧酸还原酶CAR、磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶PPTcg-1、分支酸-丙酮酸裂解酶ubiC和抗反馈抑制DAHP合成酶ARO4突变体ARO4K229L，所得菌株命名为工程菌2；所述工程菌2为能够生产天麻素的工程菌株；
所述糖基转移酶AsUGT为来源于蛇根木的UDP-葡萄糖基转移酶；所述羧酸还原酶CAR来源于诺卡氏菌；所述磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶PPTcg-1来源于谷氨酸棒杆菌；所述分支酸-丙酮酸裂解酶ubiC来源于大肠杆菌；所述抗反馈抑制DAHP合成酶ARO4突变体ARO4K229L是将来源于酿酒酵母的抗反馈抑制DAHP合成酶ARO4的第229位赖氨酸突变为亮氨酸后得到的突变体蛋白。
3.一种构建能够生产天麻素的工程菌株的方法，包括如下步骤(A3)：
(A3)使受体菌不表达分支酸变位酶ARO7，表达糖基转移酶AsUGT、羧酸还原酶CAR、磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶PPTcg-1、分支酸-丙酮酸裂解酶ubiC和抗反馈抑制DAHP合成酶ARO4突变体ARO4K229L，所得菌株命名为工程菌3；所述工程菌3为能够生产天麻素的工程菌株；
所述糖基转移酶AsUGT为来源于蛇根木的UDP-葡萄糖基转移酶；所述羧酸还原酶CAR来源于诺卡氏菌；所述磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶PPTcg-1来源于谷氨酸棒杆菌；所述分支酸-丙酮酸裂解酶ubiC来源于大肠杆菌；所述抗反馈抑制DAHP合成酶ARO4突变体ARO4K229L是将来源于酿酒酵母的抗反馈抑制DAHP合成酶ARO4的第229位赖氨酸突变为亮氨酸后得到的突变体蛋白。
4.一种构建能够生产天麻素的工程菌株的方法，包括如下步骤(A4)：
(A4)使受体菌不表达分支酸变位酶ARO7，表达糖基转移酶AsUGT、羧酸还原酶CAR、磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶PPTcg-1、分支酸-丙酮酸裂解酶ubiC、磷酸烯醇丙酮酸合酶ppsA、转酮酶tktA、EPSP合酶ARO1、分支酸合酶ARO2和抗反馈抑制DAHP合成酶ARO4突变体ARO4K229L，所得菌株命名为工程菌4；所述工程菌4为能够生产天麻素的工程菌株；
所述糖基转移酶AsUGT为来源于蛇根木的UDP-葡萄糖基转移酶；所述羧酸还原酶CAR来源于诺卡氏菌；所述磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶PPTcg-1来源于谷氨酸棒杆菌；所述分支酸-丙酮酸裂解酶ubiC、所述磷酸烯醇丙酮酸合酶ppsA和所述转酮酶tktA来源于大肠杆菌；所述EPSP合酶ARO1和所述分支酸合酶ARO2来源于酿酒酵母；所述抗反馈抑制DAHP合成酶ARO4突变体ARO4K229L是将来源于酿酒酵母的抗反馈抑制DAHP合成酶ARO4的第229位赖氨酸突变为亮氨酸后得到的突变体蛋白。
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