[发明专利]一种快速检测食源性致病菌沙门氏菌用标准化质粒冻干粉

权利要求书

1.一种快速检测食源性致病菌沙门氏菌用标准化质粒冻干粉，其特征在于，利用如下步骤制备获得，

（一）提取沙门氏菌全基因组DNA、设计引物并进行PCR扩增

提取沙门氏菌全基因组DNA备用；

同时针对目标毒力基因invA和fimI，分别设计PCR扩增用引物序列如下：

fimI-F：5’- CACTAAATCCGCCGATCAA-3’，

fimI-R：5’- CAACGGTGAGGAGGTATTATC-3’；

扩增产物262bp；

invA-F：5’- GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA-3’，

invA-R ：5’-TCATCGCACCGTCAAAGGACCC-3’；

扩增产物284bp；

以所提取的沙门氏菌全基因组DNA为模板，利用上述引物进行序列扩增；

对PCR扩增产物进行回收、纯化备用；

（二）连接、转化

以pLB质粒作为连接载体，将步骤（一）中的扩增产物分别与pLB质粒进行连接，并进行转化；

（三）筛选、鉴定并提取质粒

对步骤（二）中的转化产物进一步提取质粒进行鉴定，对鉴定正确的菌株进行传代培养，并最终提取质粒备用；

（四）制备冻干粉成品

将步骤（三）所制备质粒进一步制备成冻干粉，即为评价沙门氏菌致病性时的标准化质粒标准品。

2.如权利要求1所述快速检测食源性致病菌沙门氏菌用标准化质粒冻干粉，其特征在于，步骤（一）中，提取沙门氏菌全基因组DNA时，以鼠伤寒沙门氏菌CMCC 50071、CMCC50115、ATCC 14028或者肠炎沙门氏菌CICC 21482这四种菌株中任一种为全基因组DNA来源。

3.权利要求1所述快速检测食源性致病菌沙门氏菌用标准化质粒冻干粉在食品检测中应用，其特征在于，利用PCR检测时，作为阳性对照模板样品进行应用。

4.如权利要求3所述快速检测食源性致病菌沙门氏菌用标准化质粒冻干粉在食品检测中应用，其特征在于，用于菊花检测，以判定菊花是否受到致病性沙门氏菌污染。

5.利用权利要求1所述食源性致病菌沙门氏菌用标准化质粒冻干粉的沙门氏菌检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（一）处理样品

对检测样品进行处理，提取待检测样品中微生物DNA；

（二）设计引物并进行PCR扩增

引物序列为：

fimI-F：5’- CACTAAATCCGCCGATCAA-3’，

fimI-R：5’- CAACGGTGAGGAGGTATTATC-3’；

invA-F：5’- GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA-3’，

invA-R ：5’-TCATCGCACCGTCAAAGGACCC-3’；

以步骤（一）中所提取微生物DNA为模板，分别利用上述引物对中一对、两对或者任意几对进行PCR扩增，以此作为检测样；

同时，利用沙门氏菌用标准化质粒冻干粉作为模板，分别利用上述引物对中一对、两对或者任意几对进行PCR扩增，以此作为标准样；

（三）对比和鉴定

对步骤（二）中扩增产物进行电泳分析和对比，如果检测样具有与标准样相同带型，则表明待检样品受到了沙门氏菌污染。