[发明专利]固相萃取柱及其制备方法和乳铁蛋白的检测方法

说明书

本发明属于生化检测技术领域，具体涉及一种固相萃取柱及其制备方法和乳铁蛋白的检测方法。该固相萃取柱的制备方法包括如下步骤：提供硅烷偶联剂、螯合剂、载体材料和金属离子前驱体；将所述硅烷偶联剂和所述螯合剂结合，得到交联复合物；将所述交联复合物与所述载体材料和所述金属离子前驱体溶于溶剂中进行反应，得到混合填料；将所述混合填料置于萃取柱模具中进行固化处理，得到固相萃取柱。该制备方法得到的固相萃取柱利用金属螯合亲和层析和固相萃取相结合的原理可以很好地吸附纯化乳铁蛋白，后续与液相色谱结合，可以准确、简便、快速地测定婴幼儿配方奶粉中的乳铁蛋白，具有很好地应用前景。

技术领域

本发明属于生化检测技术领域，具体涉及一种固相萃取柱及其制备方法和乳铁蛋白的检测方法。

背景技术

乳铁蛋白(lactoferrin，LF)是母乳中的主要蛋白质之一，为了使婴幼儿配方奶粉的营养成分更贴近于母乳，乳铁蛋白作为一种安全性极高、可被婴儿摄入的营养添加剂，被广泛地应用于婴幼儿配方奶粉中。目前市场上的婴幼儿配方奶粉品种众多，而奶粉中的乳铁蛋白含量是否与标签范围相符合，或者是否真正含有乳铁蛋白等问题不得而知。如今国内外还没有测定婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白的国家标准，所以建立准确高效的婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白的检测方法也成为研究热潮。

测定乳铁蛋白的方法有很多种，主要有高效毛细管电泳法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱串联质谱法等。高效液相色谱法因为其灵敏度和精密度高、样品用量少、色谱柱可反复使用等优点得到了广泛应用。但是，高效液相色谱法对检测样品纯度要求较高，需要经过复杂的预处理和肝素亲和柱净化后才能进样，而且要手动加压过柱，过柱较为困难费劲、耗时长、过程繁琐，且肝素亲和柱的价格昂贵、不宜重复使用，所以样品的分离纯化限制了高效液相色谱法应用于婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白的测定。

因此，现有技术有待改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种固相萃取柱及其制备方法和乳铁蛋白的检测方法，旨在解决现有乳铁蛋白测定的样品分离纯化繁琐、成本高的技术问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明一方面提供一种固相萃取柱的制备方法，包括如下步骤：

提供硅烷偶联剂、螯合剂、载体材料和金属离子前驱体；

将所述硅烷偶联剂和所述螯合剂结合，得到交联复合物；

将所述交联复合物与所述载体材料和所述金属离子前驱体溶于溶剂中进行反应，得到混合填料；

将所述混合填料置于萃取柱模具中进行固化处理，得到固相萃取柱。

以及，一种固相萃取柱，所述固相萃取柱由本发明所述的固相萃取柱的制备方法制备得到。

本发明提供的固相萃取柱的制备方法，将硅烷偶联剂和螯合剂进行反应结合得到交联复合物后，与载体材料和金属离子前驱体溶于溶剂中进行反应得到混合填料，然后将混合填料置于萃取柱模具中进行固化处理，即可以得到用于分离纯化乳铁蛋白的固相萃取柱；将该固相萃取柱代替肝素亲和柱，利用金属螯合亲和层析和固相萃取相结合的原理可以很好地吸附纯化乳铁蛋白，后续与液相色谱结合，可以准确、简便、快速地测定婴幼儿配方奶粉中的乳铁蛋白，具有很好地应用前景。

本发明另一方面提供一种乳铁蛋白的检测方法，包括如下步骤：

提供样品溶液；

采用本发明所述地固相萃取柱对所述样品溶液进行萃取处理，得到萃取液；

对所述萃取液进行液相色谱分析。