[发明专利]靶向EBV的LMP2-mRNA纳米疫苗

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种LMP2抗原增强型mRNA及其设计方法和应用、一种靶向纳米制剂载体及其制备方法和应用和一种LMP2mRNA脂质体疫苗及其制备方法和应用。所述设计采用MHC‑I分子胞内序列，可显著提高表达抗原被MHC‑I和MHC‑II递呈的效率。该方法具有通用性，所设计的LMP2抗原增强型mRNA具有较强的免疫原性，所制备的mRNA疫苗可用于治疗以鼻咽癌为代表的一系列由该病毒感染导致的癌症和肿瘤。

优先权申请

本申请要求2019年7月17提交的中国发明专利申请201910648034.4“靶向EBV的LMP2-mRNA纳米疫苗”的优先权，该优先权发明专利申请以引用方式全文并入。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种LMP2抗原增强型mRNA及其设计方法和应用、一种靶向纳米制剂载体及其制备方法和应用和一种LMP2-mRNA脂质体疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

根据国际癌症研究机构的数据，2018年，鼻咽癌新发病例约为12.9万例，占2018年全部确诊病例的0.7％。然而，其全球分布极不平衡，在东亚和东南亚尤为普遍，占新发病例的70％以上。男性鼻咽癌发病率高于女性，2015年中国鼻咽癌发病率比例约为2.5。鼻咽癌以其独特的地理分布为特征，鼻咽癌在生物学、流行病学、组织学、自然史以及治疗反应等方面均不同于其他头颈癌，因而鼻咽癌的治疗有其特殊性。这些发现表明，遗传、种族和环境因素的结合可能会影响鼻咽癌的发病机制。

放疗是目前治疗鼻咽癌的主要手段，也是未播散的鼻咽癌治疗的基本方式。由于鼻咽部解剖的特殊性，手术不适用于鼻咽癌的初治。但放疗对机体的非特异性损伤巨大。局部复发和远处转移是鼻咽癌治疗失败的两个原因。因此，在常规治疗的基础上迫切需要寻找新的综合治疗手段，近几十年来，随着分子生物学和肿瘤免疫学的研究进展，使用分子生物学手段提高患者细胞免疫，预防鼻咽癌复发和转移并作为传统治疗方法的补充，已受到人们越来越多的重视。

在恶性肿瘤中病毒性抗原是最具有免疫原性的分子，并且是保护性肿瘤免疫中最具显著意义的肿瘤抗原，EB病毒作为疱疹病毒科成员，是第一个被发现的与人类肿瘤有关的病毒。现已明确EB病毒是导致鼻咽癌、淋巴瘤及免疫抑制后淋巴瘤的主要病因之一。EB病毒表达的潜在膜蛋白LMP1、LMP2发挥多重致瘤作用，可通过激活多重信号转导以及调控各种致肿瘤基因的表达发挥作用。在治疗性疫苗方面，EBV核抗原EBNA1、潜伏膜抗原LMP1和LMP2是主要的治疗靶点。

LMP2是鼻咽癌等EB病毒相关肿瘤的组织中持续表达的病毒蛋白之一，并且不引起B淋巴细胞转化，体内外研究已证明EB病毒LMP2基因可很好的诱导产生特异性细胞免疫应答。因此，LMP2成为在诱导EB病毒特异性细胞免疫应答、预防和治疗相关肿瘤的良好靶抗原。为引发针对LMP2的特异性细胞免疫应答，就必须首先选择一个适合治疗应用的LMP2表达系统。

目前针对LMP2的疫苗，只有多肽、DNA疫苗及CTL细胞治疗处于临床研究阶段，而mRNA疫苗未见文献报导。

发明内容

有鉴于此，本发明目的之一在于提供一种增强EBV mRNA疫苗免疫原性的方法。该方法具有通用性，可简便的拓展到其他EBV导致的癌症的治疗性mRNA疫苗研发中。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：

一种增强EBV mRNA疫苗免疫原性的方法，其中mRNA的转录模板DNA由启动子、5’端非翻译区、MHC-I型分子的分泌信号、抗原编码区、跨膜及胞质结构域、3’端非翻译区、A120和A120后的末端序列依次连接组成。

其中，A120的末端序列包括能从polyA末端酶切的限制性酶切位点，包括但不限于BspQI、SapI、EarI等。