[发明专利]一种微孔载体检测抑制物的测定方法

权利要求书

1.一种微孔载体检测抑制物的测定方法，其特征在于，在微孔板的微孔内注入40μl的琼脂培养基制成微孔载体，在微孔载体上载入药物样品以及病原菌孢子，检测药物对孢子萌发的抑制作用，测定方法的步骤如下：

1)用微孔板制备合格的微孔载体

①微孔板的卡稳：准备一个能将微孔板卡稳及平置的、表面洁净的卡稳工具，转入无菌工作台，将洁净的微孔板卡于卡稳工具上；

②琼脂培养基的熔化：取病原菌孢子萌发适用的用三角瓶装盛的琼脂培养基加热熔化；

③培养基的80℃处置：预先将普通水浴锅加热恒温到80℃，将操作②熔化的培养基放入该水浴锅中，平衡至80℃；

④移液枪无泡移液的处置：把操作③平衡至80℃的培养基转入无菌工作台，把移液枪取液量调到40μl，将枪头伸入80℃的培养基中反复吸排培养基，直至排液操作不出现气泡现象；

⑤微孔载体的制备：操作④无气泡现象后，过量按下移液枪吸取培养基，提起枪头并靠贴在三角瓶瓶口壁上脱除枪头外部粘附的培养基，再转移到微孔板的微孔内，注入40μl培养基到微孔底部，并将枪头留在培养基液内作环转移动，引导培养基均匀分布于微孔底面，冷却后形成一个琼脂培养基的微小平板，作为测试工作用的微孔载体；在注完一个微孔后，母指按住移液枪，返回移到80℃三角瓶培养基中，同样的吸液操作注制下一个微孔载体，连续操作直到注制的微孔载体数量达到测试需要的数量；

⑥合格微孔载体的标识：将操作⑤注制完毕的微孔板从卡稳工具中取出，在微孔板下方放置一个直线工具，反转微孔板，把板的底面朝向操作者，透过注制成的微孔载体观察直线，观察到直线弯曲或弯折的微孔载体是有气泡、或者没有平展的琼脂块，属于不合格的微孔载体，用记号笔在该微孔底部标注，未标注的微孔载体是合格微孔载体；

2)将待测样品载入微孔载体

将已配备的待检测的药物样品液及测试对照处理样品液，转至无菌工作台，用移液枪吸取样品液10μl，在枪头不触及微孔载体面的情况下点放于步骤1)制备的合格微孔载体表面的中部，让其自动在微孔载体面上扩展分散，静置在无菌工作台让药物样品液干化，成为载药微孔载体；

3)将病原菌孢子载入微孔载体

无菌条件下，将已备好的病原菌孢子液充分悬浮均匀，用移液枪吸取孢子液1μl，在枪头不触及微孔载体面的情况下点放于步骤2)配成的载药微孔载体的中部，让孢子液自然分散；

4)孢子萌发培养

将步骤3)操作完毕后的微孔板平置于洁净的保湿器具内，转移到培养箱中恒温培养，直至空白对照处理的孢子充分萌发；

5)结果观测

从培养箱中取出步骤4)的培养材料，打开保湿器具的盖子，将载着微孔载体的微孔板倒置放于显微镜的载物台上，将物镜镜头对正微孔底面，调整镜头焦点对到微孔载体面的孢子，观察和记录各个微孔载体上孢子的萌发情况；根据对照处理的数据，计算所测定药物对孢子萌发的抑制作用。