[发明专利]一种短周期高效全雄中华鳖苗种的繁育方法

说明书

本发明涉及全雄中华鳖苗种繁育技术，尤其涉及一种短周期高效全雄中华鳖苗种的繁育方法。包括鳖蛋控温孵化、鳖蛋雌激素处理、稚鳖温室养殖、伪雌鳖筛选和亲鳖塘繁育步骤，其中，鳖蛋控温孵化中控制鳖蛋孵化温度为28±1℃；鳖蛋雌激素处理为在中华鳖胚胎孵化的15‑18时期，每个时期在最靠近胚胎位置的蛋壳面滴加雌二醇溶液，伪雌鳖筛选采用荧光定量PCR技术。本发明采用性激素滴加诱导伪雌鳖技术，操作简单，转化率高，稚鳖温室养殖大大缩短了性成熟周期，将利用荧光定量PCR技术筛选出的伪雌鳖与原系雄鳖正常交配可达到全雄鳖苗种。本发明提供的全雄中华鳖苗种繁育方法周期短、商品化程度高，可以显著提高经济效益。

技术领域

本发明涉及全雄中华鳖苗种繁育技术，尤其涉及一种短周期高效全雄中华鳖苗种的繁育方法。

技术背景

中华鳖(Pelodiscus sinensis)俗称甲鱼，是我国重要的名贵水产养殖品种。中华鳖雄鳖比雌鳖生长速度快，裙边宽厚，脂肪少，价格高，因此开展中华鳖全雄苗种单性养殖可以显著提高经济效益，对中华鳖养殖产业发展具有重大意义。

正常发育中华鳖性别决定属雌性异配型，即雌鳖性染色体为ZW型，雄鳖性染色体为ZZ型。对早期中华鳖鳖蛋进行17β-雌二醇药物处理，可以诱导中华鳖未分化的性腺向雌性性腺发育，产生中华鳖性腺为卵巢基因型为ZZ的伪雌鳖。筛选出中华伪雌鳖(ZZ)与原系中华鳖雄鳖(ZZ)进行繁殖，能够实现全雄鳖繁殖。

目前缺乏经济、高效的全雄中华鳖苗种繁育技术，尤其对于伪雌鳖的人工诱导方式还比较复杂，转化率较低；同时对伪雌鳖的鉴定方式也较为复杂，不仅会导致中华鳖死亡，也无法适用于大批量中华鳖样品鉴定。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种短周期高效全雄中华鳖苗种的繁育方法。

本发明采用了以下技术方案：

一种短周期高效全雄中华鳖苗种的繁育方法，包括以下步骤：

S1.鳖蛋控温孵化：控制鳖蛋孵化温室温度为28±1℃；

S2.鳖蛋雌激素处理：对中华鳖胚胎孵化至15-18时期的鳖蛋，每个时期进行一次药物处理，所述药物处理位置是最靠近胚胎的蛋壳面滴加雌二醇溶液；

S3.稚鳖温室养殖：稚鳖出壳后约1周时间，将稚鳖转移到温室成鳖养殖水池，控制水池温度32摄氏度并每日定时喂食。

S4.伪雌鳖筛选：设定一组中华鳖伪雌鳖性别鉴定引物对，包括一对目的基因18SrRNA和内参基因Gapdh，采用荧光定量PCR反应，利用性成熟的中华鳖表型雌鳖个体的目的基因18S rRNA在W和Z染色体上DNA拷贝数的不同将伪雌鳖筛选出来，所述目的基因18SrRNA和内参基因Gapdh引物均包括F和R两条引物，所述目的基因18S rRNA和内参基因Gapdh的引物序列如下所示：

表一.引物序列

Table1.Perimer sequences

S5.亲鳖塘繁育：将步骤S4鉴定出的伪雌鳖与雄鳖在亲鳖塘繁殖得到子代全雄鳖。

优选的，步骤S1鳖蛋控温孵化中鳖蛋放置在温室中的孵化箱孵化，所述孵化箱底部预先铺厚度为5cm的蛭石，调整鳖蛋的动物极向上放置，并在鳖蛋上覆盖约1cm厚的蛭石，所述蛭石湿度在8-12％RH。

优选的，步骤S2中雌二醇溶液滴加剂量为5μL/次，滴加浓度为50μg/μL，所述雌二醇溶液采用95wt％乙醇为溶剂进行配置。

优选的，步骤S2中中华鳖胚胎孵化时期采用胚胎发育形态特征判断，所述15-18时期的胚胎发育形态变化特征如下：