[发明专利]一种检测DNA甲基化修饰影响转录因子与DNA序列结合的方法

权利要求书

1.一种检测DNA甲基化修饰影响转录因子与DNA序列结合的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)诱导转录因子表达编码蛋白，并纯化表达得到的蛋白，得到纯化蛋白；所述转录因子为BPC2转录因子，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

(2)根据所述转录因子的结合位点设计特异性DNA探针，对所述特异性DNA探针的胞嘧啶进行甲基化修饰，得到启动子DNA探针；所述特异性DNA探针针对杨树OM47基因启动子区域设计，所述杨树OM47基因启动子区域的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，设计得到的特异性DNA探针为pro-OM47-F和pro-OM47-R，其中pro-OM47-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，pro-OM47-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，对pro-OM47-F包含的胞嘧啶碱基进行DNA甲基化修饰后，核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；对DNA甲基化修饰探针以及DNA未甲基化修饰探针进行生物素标记；

(3)使所述纯化蛋白和所述启动子DNA探针发生结合反应，根据结合条带强弱与有无检测蛋白-DNA的特异性结合能力，从而评价DNA甲基化修饰对转录因子结合的影响；进行所述结合反应时，还包括：设置所述纯化蛋白与未进行DNA甲基化修饰以及所述启动子DNA探针的结合反应体系，同时设置冷探针的竞争梯度，从而根据结合条带强弱与有无检测蛋白-DNA的特异性结合能力；

步骤(1)和步骤(2)之间不存在时间上的先后顺序。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中利用原核表达方法诱导所述转录因子表达编码蛋白。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中利用表达得到的蛋白所携带的标签进行纯化。