[发明专利]烟草Nt-miRNA203在烟碱含量调节中的应用

说明书

本发明属于烟草基因工程领域，具体涉及一个烟草miRNA基因Nt‑miRNA203在烟草烟碱含量调节中的应用的专利申请。Nt‑miRNA203成熟体长度为24bp，该miRNA基因的基因组序列长度为401bp，序列如SEQ ID NO.3所示。Nt‑miRNA203与烟草中烟碱转运蛋白MATE1调节相关，进而调节烟碱含量分布情况。进一步地对该基因的功能验证表明，超表达该基因后，可抑制烟碱转运通路有关的靶基因，从而调节烟碱分布情况，最终呈现烟叶中烟碱含量降低的技术效果。基于此技术效果，可为烟草中烟叶烟碱含量调节、以及低烟碱品种的培育奠定一定技术基础。

技术领域

本发明属于烟草基因工程领域，具体涉及一个烟草miRNA基因Nt-miRNA203在烟草烟碱含量调节中的应用的专利申请。

背景技术

烟碱（尼古丁）是烟草中含量最高的生物碱，约占总生物碱含量的 90%左右，也是吸烟成瘾的主要原因之一。已有研究认为，烟碱主要在烟草根系中合成，随后再通过木质部运输到其他组织器官中。

随着烟草基因组测序工作开展，以及通过对相关功能基因研究，目前已获得了部分与烟碱含量调节的相关基因，这些基因的功能涉及烟碱转运、降解和转运等多个方面，为解析烟碱代谢机制奠定了较好基础。但进一步统计归类表明，目前有关烟碱代谢的基因报道绝大部分都是编码蛋白基因，而已有生物研究认为，一些miRNA对于部分代谢产物含量的调节也具有十分重要的影响，因此，对于烟碱代谢通路中的相关功能基因、以及相关非编码基因的进一步研究，对于进一步地烟草品种的改良以及烟草新品种培育具有十分重要的技术意义。

发明内容

本申请目的在于提供一个对烟草中烟碱含量具有调节作用的miRNA基因Nt-miRNA203，从而为低烟碱烟草新品种的培育奠定一定技术基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

烟草Nt-miRNA203，成熟体长度为24bp，序列如SEQ ID NO.1所示，具体为：

AAUUUUCUGUUGGGCUCGGAACGU；

该miRNA基因的前体RNA序列长度108bp，序列如SEQ ID NO.2所示，具体为：

UGGAAGGAAUUAACCCAACAACCUUGGGCAACAGUGAGGGGAUUAAAUUCCUUAAGGAAACACAAUUUUCUGUUGGGCUCGGAACGUUGUUCAUCUAAUUCUCUUUCU

该miRNA基因的基因组序列长度为401bp（包括上游151bp，下游142bp），序列如SEQID NO.3所示，具体为：

TGCATATTCTCCCTTCTTTCTTCTACATTTCTGCATTGTTTTCCAAAAGTAAAAACATAAGCATCAGTGTAGTTCATTGACGTTTGTTGAGTTCGACGAAGTCCTATAATTTTCATTGTAGGTATTACAGAATAGTTGTTCCGTTCTATCCTGGAAGGAATTAACCCAACAACCTTGGGCAACAGTGAGGGGATTAAATTCCTTAAGGAAACACAATTTTCTGTTGGGCTCGGAACGTTGTTCATCTAATTCTCTTTCTATCTTTTGTTTCTGATTTCGTTTTATTTTGCAGAAATTATATTTTCGAATACAAATACTAACAAGCTTAAGGAATTTAGTTTTTTTTATATTCTGTATTCATCTTACTTTCTGCTTTGGGAGACTAAAATCCTAGTGATTTT。

所述烟草Nt-miRNA203的基因组（401bp）的制备方法，通过PCR扩增方法制备获得，具体包括如下步骤：

（1）提取基因组

以烟草红花大金元品种叶片为样品，利用CTAB法提取其基因组DNA；