[发明专利]一种人血浆中儿茶酚胺的液相色谱串联质谱检测方法

权利要求书

1.一种人血浆中儿茶酚胺的液相色谱质谱联用的内标定量检测方法，包括以下步骤：

(1)溶液配置和样本前处理：

配制一系列浓度梯度的儿茶酚胺标准溶液及一定浓度的儿茶酚胺内标溶液；

用离子交换固相萃取对添加儿茶酚胺内标溶液的血浆样本进行前处理，得到供试品溶液；

用离子交换固相萃取对分别添加儿茶酚胺内标溶液的一系列浓度梯度的儿茶酚胺标准溶液进行前处理，得到一系列的对照品溶液；

所述儿茶酚胺包括肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺；

(2)采用液质联用检测所述供试品溶液和对照品溶液：

色谱柱采用反相五氟苯基色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为体积百分浓度0.01～1％的甲酸水溶液；流动相B为甲醇；采用梯度洗脱，采用梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0～1.0min，流动相B体积百分比维持在0.0％～1.5％；1.0～2.5min，流动相B体积百分比由0.0％～1.5％增至5.0％～8.0％；2.5～3.0min，流动相B体积百分比由5.0％～8.0％递增92.0％～95.0％；3.00～3.5min，流动相B体积百分比维持在92.0％～95.0％；3.5～4.0min，流动相B由92.0％～95.0％递减至0.0％～1.5％。

质谱条件为：离子源为ESI；离子模式为正离子模式；监测模式为MRM；

(3)定量测定方法：

将所述对照品溶液以及供试品溶液按所述(2)色谱条件依次进样，记录色谱图；将对照品溶液中儿茶酚胺对其内标物的峰面积的比值与儿茶酚胺浓度进行线性回归产生标准曲线和/或拟合方程，或由质谱软件系统自动生成标准曲线和/或拟合方程；将供试品溶液中儿茶酚胺对其内标物的峰面积的比值代入至所述标准曲线和/或拟合方程，计算得到血浆样本中儿茶酚胺浓度，或由质谱软件系统给出样本中儿茶酚胺浓度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述前处理包括上样、淋洗、洗脱，收集的洗脱液浓缩，再加入复溶溶剂。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述前处理包括以下步骤：

1)样品预处理：取样本，加入乙酸铵溶液，充分混匀；

2)上样：将预处理过的样本上样至离子交换固相萃取装置，利用正压装置排干；

3)淋洗：用乙酸铵溶液进行淋洗，利用正压装置排干；

4)洗脱：用甲酸乙腈溶液分三次洗脱，收集洗脱液，混匀；

5)氮吹：将收集液全部在氮气吹至近干；

6)复溶：加入甲酸水溶液进行复溶。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述离子交换固相萃取为弱阳离子交换反相固相萃取。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述弱阳离子交换反相固相萃取吸附剂的类型为96孔板。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，流动相A中甲酸水溶液的体积百分浓度为0.01～0.5％；优选的，流动相A中甲酸水溶液的体积百分浓度为0.05～0.3％；更有选的，流动相A中甲酸水溶液的体积百分浓度为0.1～0.2％。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，色谱柱为ACQUITY UPLC HSSPFP Column,1.8μm,2.1mm X 100mm。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，液相色谱的柱温为25.0～45.0℃；优选的，液相色谱的柱温为30.0～40.0℃；优选的，液相色谱的柱温为35.0～40.0℃。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，液相色谱的进样量为0.5～50.0μL；优选的，液相色谱的进样量为1.0～40.0μL；优选的，液相色谱的进样量为5.0～30.0μL。