[发明专利]一种人血浆中儿茶酚胺的液相色谱串联质谱检测方法

说明书

本发明公开一种人血浆中儿茶酚胺的液相色谱质谱联用的检测方法，包括以下步骤：(1)样本前处理：血浆样本采用离子交换固相萃取进行前处理，得到供试品溶液；(2)液相色谱质谱联用检测所述供试品溶液：色谱柱采用反相五氟苯基色谱柱；流动相A为甲酸水溶液；流动相B为乙腈、或甲醇、或乙腈与甲醇的混合液；采用梯度洗脱。本发明还公开一种人血浆中儿茶酚胺的液相色谱质谱联用的内标定量检测方法。本发明的方法能够有效检出人血浆中儿茶酚胺，具有分离效果好，基线平稳，检测时间短，线性好，准确度高，重现性好，灵敏度高，精密度高的特点。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，具体涉及一种人血浆中儿茶酚胺(肾上腺素、去甲肾上腺素及多巴胺)液相色谱串联质谱检测方法。

背景技术

儿茶酚胺类物质主要包括肾上腺素(Epinephrine,E)、去甲肾上腺素(Norepinephrine,NE)及多巴胺(Dopamine,DA)。儿茶酚胺类物质是由肾上腺髓质、肾上腺神经元以及肾上腺外嗜铬体合成与分泌的单胺类神经递质，具有较强的生理学活性的内源性物质，在大脑和神经信号传导中起着重要的作用。血浆中儿茶酚胺类物质浓度水平与人体多种生理、病理现象有密切关系，检测生物样本中的儿茶酚胺类物质浓度不仅对于嗜铬细胞瘤、副神经节瘤、神经母细胞瘤、高血压、心肌梗塞、肾上腺髓质增生等疾病的诊断和治疗具有重要的临床意义，并且有助于甲状腺功能异常、充血性心力衰竭、糖尿病、肾功能不全等疾病的诊断。近年来，国内外对儿茶酚胺类物质的分析检测主要为高效液相色谱法、荧光光度法、毛细管电泳法、化学发光分析法、电化学分析法及液质联用法。大多数方法的灵敏度可以满足尿液儿茶酚胺的检测，但是对于血浆样品，目前医院常规采用的是电化学分析法，但是电化学分析法样本处理复杂，分析时间长，对于快速获得诊断结果具有一定的局限性。随着质谱技术的不断发展，我们可以开发出一种检测灵敏度、特异性大大提高的方法，并且能有效减少样品处理和分析时间，快速的得到正确的结果。

现有技术CN106442837A报道了一种利用液相色谱串联质谱检测血浆中儿茶酚胺的方法，该方法需要先对样品进行衍生化，前处理繁琐，耗费时间长，检测效率低。现有技术CN107966520A公开了一种用液相色谱串联质谱技术检测儿茶酚胺及代谢产物的方法，该方法检出限较高、灵敏度低，难以满足临床对于疾病的诊断。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种液相色谱质谱联用检测人血浆中儿茶酚胺的方法，该方法具有样品无需衍生化前处理、前处理耗时短、精密度和灵敏度高、重现性好的特点。

为解决上述技术问题，本发明提供一种人血浆中儿茶酚胺的液相色谱质谱联用的内标定量检测方法，包括以下步骤：

(1)溶液配置和样本前处理：

配制一系列浓度梯度的儿茶酚胺标准溶液及一定浓度的儿茶酚胺内标溶液；

用离子交换固相萃取对添加儿茶酚胺内标溶液的血浆样本进行前处理，得到供试品溶液；

用离子交换固相萃取对分别添加儿茶酚胺内标溶液的一系列浓度梯度的儿茶酚胺标准溶液进行前处理，得到一系列的对照品溶液；

所述儿茶酚胺包括肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺；

(2)液相色谱质谱联用检测所述供试品溶液：

其中，液相色谱条件为：色谱柱采用反相五氟苯基色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B；流动相A为体积百分浓度0.01～1.0％的甲酸水溶液；流动相B为甲醇；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0～1.0min，流动相B体积百分比维持在0.0％～1.5％；1.0～2.5min，流动相B体积百分比由0.0％～1.5％增至5.0％～8.0％；2.5～3.0min，流动相B体积百分比由5.0％～8.0％递增92.0％～95.0％；3.00～3.5min，流动相B体积百分比维持在92.0％～95.0％；3.5～4.0min，流动相B由92.0％～95.0％递减至0.0％～1.5％。