[发明专利]一种肝癌转移早期测诊断试剂盒

权利要求书

1.一种肝癌转移早期测诊断试剂盒，其特征在于，包括鼠抗人S100A11单克隆抗体、封闭液、工作液、抗体稀释液、羊抗人二抗、DAB显色液、浓度为0.01mol/L的柠檬酸钠缓冲液、苏木素染液、中性树脂、70％乙醇、75％乙醇、80％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、二甲苯、PBS；

所述的封闭液是用磷酸盐缓冲液PBS作为溶剂配制的5％牛血清蛋白溶液；所述的工作液是用PBS溶液作为稀释液将30％H₂O₂溶液稀释为3％的H₂O₂溶液；所述的抗体稀释液包括0.1％(V/V)Tween-20的磷酸盐、pH7.4的0.1MPBS溶液。

2.如权利要求1所述的一种肝癌转移早期测诊断试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取待检测者肝部组织进行石蜡包埋切片，放置于60℃烘箱中15min，将所述石蜡切片脱蜡至水，得到所述脱蜡后的切片；

2)将所述脱蜡后的切片置于二甲苯中10min，更换二甲苯再浸泡10min，而后无水乙醇浸泡5min，95％乙醇浸泡5min，80％乙醇浸泡5min，75％乙醇浸泡5min，70％乙醇浸泡5min，PBS浸泡5min后更换PBS重复浸泡3次，得到初步处理后的切片；

3)将初步处理后的切片置于工作液室温孵育20min，以消除内源性过氧化物酶的活性，得到灭酶处理后的切片；

4)用蒸馏水冲洗灭酶处理后的切片，而后PBS浸泡5min并更换PBS重复浸泡3次，得到清洗后切片；

5)将清洗后切片放入浓度为0.01mol/L的柠檬酸钠缓冲液中，并置于微波炉内加热，温度为90-99℃，然后室温放置11-15min，重复上述步骤3次，得到抗原修复后的切片；

6)将所述抗原修复后的切片放置于封闭液中，室温孵育20～30min后，除去封闭液，向所述切片中滴加鼠抗人S100A11单克隆抗体，37℃孵育1～2小时，得到处理后的切片；

7)将处理后的切片置于PBS浸泡5min，并更换PBS重复浸泡3次；

8)向上述处理后的切片中滴加HRP标记的羊抗人二抗37℃孵育60min，得到二抗处理后的切片；

9)将所述二抗处理后的切片置于PBS浸泡5min，并更换PBS重复浸泡3次；

10)向上述处理后的切片中滴加适量工作液，37℃孵育60min；

11)将上述处理后的切片置于PBS浸泡5min，并更换PBS重复浸泡3次；

12)将上述处理后的切片置于DAB显色液中室温显色，在显微镜下观察切片的显色过程，反应时间控制在5～10min，用蒸馏水冲洗切片，得到显色后切片；

13)向所述显色后切片上滴加苏木素染液，轻度复染所述切片，而后用盐酸酒精分化所述切片30s，蒸馏水冲洗所述切片10min，得到复染后的切片；

14)将所述复染后的切片，依次75％乙醇浸泡5min80％乙醇浸泡5min，95％乙醇浸泡5min并重复3次，100％乙醇浸泡5min并重复3次，二甲苯浸泡20min并重复3次，使用中性树胶进行封片；

15)显微镜对封片进行拍照，使用DPController图像采集系统采图；采图后，根据细胞染色强度及阳性面积给予免疫组化评分。