[发明专利]一种肝癌转移早期测诊断试剂盒

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种肝癌转移早期测诊断试剂盒，包括鼠抗人S100A11单克隆抗体、封闭液、工作液、抗体稀释液、羊抗人二抗、DAB显色液、浓度为0.01mol/L的柠檬酸钠缓冲液、苏木素染液、中性树脂、70％乙醇、75％乙醇、80％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、二甲苯、PBS；本发明试剂盒通过检测肝异常者的肝部异常部位与正常部位的S100A11蛋白表达水平，可以判断肝异常者的S100A11蛋白表达水平差异，进而判断待检者患肝癌的风险。

【技术领域】

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种肝癌转移早期测诊断试剂盒。

【背景技术】

肝癌可以大致分为2类，一类是原发性肝癌，还是一种是转移性肝癌。原生性肝癌是的是，本身生长在肝脏表面的癌症；而转移性的肝癌，则因为其他组织和器官的癌细胞，慢慢转移到肝脏处，从而慢慢生长成肝癌。一般来说，原发性的肝癌恶化到晚期的进程，要比转移性肝癌时间久很多，大概要经过15年左右的时间，才会慢慢恶化成肝癌。

对于肝癌晚期的患者来说，当被发现晚期时，那就意味着体内的癌细胞已经大量扩散了，时间越久，恶化程度就越高，有的人甚至只有短短几个月的时间可以活。所以，确诊时间起着决定性的因素。但是目前没有一种能快速且简便的肝癌转移早期测诊断试剂盒，使得肝癌的确诊时间延后，导致患者得不到及时治疗。

S100A11蛋白是钙结合蛋白S100家族的成员，该家族共二十多个成员，与大多数S100蛋白一样Ca2+结合会使其构象发生巨大的变化以便与其多种靶蛋白相互作用。在该家族中， Ca2+流是调节多种细胞进程的信号，包括凋亡、收缩、分化、基因表达和许多其他的生理过程。S100A1的靶蛋白包括Ca2+信号转导中的蛋白、神经递质释放相关蛋白(突触蛋白I、Ⅱ)、细胞骨架和细丝连接蛋白、转录因子及其调节因子、酶、以及其他Ca2+激活蛋白等。S100A11 在细胞中既有信号分子的作用又可以作为分泌蛋白起作用。

【发明内容】

鉴于以上问题，本发明提供了一种肝癌转移早期测诊断试剂盒。

本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案实现：

一种肝癌转移早期测诊断试剂盒,包括鼠抗人S100A11单克隆抗体、封闭液、工作液、抗体稀释液、羊抗人二抗、DAB显色液、浓度为0.01mol/L的柠檬酸钠缓冲液、苏木素染液、中性树脂、70％乙醇、75％乙醇、80％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、二甲苯、PBS；

所述的封闭液是用磷酸盐缓冲液PBS作为溶剂配制的5％牛血清蛋白溶液；所述的工作液是用PBS溶液作为稀释液将30％H₂O₂溶液稀释为3％的H₂O₂溶液；所述的抗体稀释液包括0.1％ (V/V)Tween-20的磷酸盐、pH7.4的0.1MPBS溶液。

一种肝癌转移早期测诊断试剂盒使用方法，包括以下步骤：

1)取待检测者肝部组织进行石蜡包埋切片，放置于60℃烘箱中15min，将所述石蜡切片脱蜡至水，得到所述脱蜡后的切片；

2)将所述脱蜡后的切片置于二甲苯中10min，更换二甲苯再浸泡10min，而后无水乙醇浸泡5min，95％乙醇浸泡5min，80％乙醇浸泡5min，75％乙醇浸泡5min，70％乙醇浸泡5min， PBS浸泡5min后更换PBS重复浸泡3次，得到初步处理后的切片；

3)将初步处理后的切片置于工作液室温孵育20min，以消除内源性过氧化物酶的活性，得到灭酶处理后的切片；

4)用蒸馏水冲洗灭酶处理后的切片，而后PBS浸泡5min并更换PBS重复浸泡3次，得到清洗后切片；