[发明专利]山羊痘病毒的增殖方法、山羊痘活疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种山羊痘病毒的增殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

将山羊痘病毒在悬浮培养细胞系上传代驯化，得到驯化病毒；

将细胞系进行悬浮扩大培养；

将驯化病毒接种至扩大培养的细胞系上，经培养得到增殖病毒；

所述传代驯化包括以下步骤：

每2.0×10⁶~4.0×10⁶个/mL浓度的细胞系接种山羊痘病毒的量为0.005~0.02MOI，培养48~120小时，得到驯化病毒；

将所述山羊痘病毒传代驯化4~6代；

所述悬浮扩大培养包括以下步骤：

将细胞系进行摇瓶悬浮培养，然后将摇瓶悬浮培养的细胞进行第一次悬浮扩大培养，培养至细胞密度为7×10⁶~9.0×10⁶个/mL，再进行第二次悬浮扩大培养，培养至细胞密度为7×10⁶~9.0×10⁶个/mL；

摇瓶的接种密度为0.9×10⁶~1.2×10⁶个/mL；

第一次悬浮扩大培养包括：将摇瓶悬浮培养的细胞接种到5L摇袋式反应器进行悬浮培养；

5L摇袋式反应器的接种密度为0.9×10⁶~1.2×10⁶个/mL；

第二次悬浮扩大培养包括：将第一次扩大培养的细胞接种到50L摇袋式反应器进行悬浮培养；

50L摇袋式反应器的接种密度为0.9×10⁶~1.2×10⁶个/mL；

所述传代驯化的培养参数为：温度36~38℃、5%CO₂、相对湿度60%、转速120~130rpm；

摇瓶的培养参数为：温度36~38℃、5%CO₂、相对湿度60%、转速120~130rpm；

5L摇袋式反应器的培养参数为：转速35~45r/min、温度36~38℃、溶氧值40%~60%、pH值7.0~7.2、通气量50~300mL/min，培养体积2.5~5.0L；

50L摇袋式反应器的培养参数为：转速35~45r/min、温度36~38℃、溶氧值40%~60%、pH值7.0~7.2、通气量50~300mL/min、培养体积20~50L；

所述山羊痘病毒为山羊痘病毒AV41株；

所述细胞系包括MDBK、Vero或ST细胞系。

2.根据权利要求1所述的山羊痘病毒的增殖方法，其特征在于，所述传代驯化包括以下步骤：

每2.0×10⁶个/mL浓度的细胞系接种山羊痘病毒的量为0.01MOI，培养96小时，得到驯化病毒。

3.根据权利要求1-2任一项所述的山羊痘病毒的增殖方法，其特征在于，所述驯化病毒的接种剂量为0.005~0.02MOI；

和/或，所述驯化病毒接种细胞系的细胞浓度为2.0×10⁶~4.0×10⁶个/mL；

和/或，所述驯化病毒接种后，培养时间为72~96h；

和/或，所述驯化病毒接种后，培养参数为：转速35~45r/min、温度36~38℃、溶氧值40%~60%、pH值7.0~7.2、通气量50~300mL/min。

4.根据权利要求3所述的山羊痘病毒的增殖方法，其特征在于，所述驯化病毒的接种剂量为0.01MOI；

和/或，所述驯化病毒接种细胞系的细胞浓度为2.0×10⁶个/mL；

和/或，所述驯化病毒接种后，培养时间为96h。

5.根据权利要求1-4任一项所述的山羊痘病毒的增殖方法增殖得到的病毒在疫苗制备中的应用，其特征在于，所述疫苗包括注射疫苗和口服疫苗。