[发明专利]山羊痘病毒的增殖方法、山羊痘活疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种山羊痘病毒的增殖方法、山羊痘活疫苗及其制备方法和应用，涉及疫苗制备技术领域。本发明提供的山羊痘病毒的增殖方法，包括以下步骤：将山羊痘病毒在悬浮培养细胞系上传代驯化，得到驯化病毒；将细胞系进行悬浮扩大培养；将驯化后病毒接种至扩大培养的细胞系上，经培养得到增殖病毒。本发明的病毒增殖方法实现了细胞系的大规模悬浮培养，提高了病毒对细胞的适应性，能够获得毒价高而稳定的山羊痘病毒。本发明提供的山羊痘病毒活疫苗的制备方法，工艺简单，成本低，缓解了疫苗制备过程中损伤病毒，疫苗稳定性差，保存时间短的技术问题。本发明提供的山羊痘活疫苗安全有效，能够应用于山羊痘的防控。

技术领域

本发明涉及疫苗制备技术领域，尤其是涉及一种山羊痘病毒的增殖方法、山羊痘活疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

山羊痘是由山羊痘病毒起的一种严重危害山羊的高度接触性传染病。山羊痘广泛分布于亚洲、欧洲、北美和非洲许多国家，目前主要在非洲、中东及亚洲的一些国家流行，对养羊业造成极大的危害，国际动物卫生组织(OIE)将该病被列为A类重大传染病，我国也将其列为一类动物疾病。建国初期山羊痘主要发生在内蒙古、甘肃、宁夏、新疆、西藏、浙江、河北等9省区。20世纪60年代中期全国各地贯彻执行以预防为主的综合防疫措施，使该病在我国得到有效的控制。但近年来山羊痘又开始在各地频频暴发，而且越来越严重。

当前接种山羊痘活疫苗是预防山羊痘最为有效的方法。山羊痘活疫苗一般采集4月龄以内的绵羊睾丸细胞制备，主要在每年的3-5月，生产季节性很强。另外，由于绵羊睾丸是从个体养殖户处采集，数量时多时少，不稳定。因而细胞批量时多时少，批次较多。

传统的山羊痘病毒制备方法是采集羊睾丸、制备羊睾丸原代细胞在转瓶上进行贴壁培养，但存在以下缺点，制约了该疫苗的批量稳定生产。

1.羊睾丸获取困难，需在羊场采集羊睾丸，季节性强，存在采集人员感染布病风险。

2.原代细胞质量不稳定、易污染、难以控制，导致疫苗质量批间差异较大。

3.采用贴壁细胞的转瓶培养工艺进行生产，操作繁琐、易污染、工作量大，成为当前该疫苗规模化生产的主要障碍。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种山羊痘病毒的增殖方法，该方法实现了细胞系的大规模悬浮培养，提高了病毒对细胞的适应性，缓解了病毒毒价低且不稳定的技术问题。

本发明的第二个目的在于提供一种山羊痘病毒在疫苗制备中的应用。

本发明的第三个目的在于提供一种山羊痘活疫苗的制备方法，该方法工艺简单，成本低，缓解了疫苗制备过程中损伤病毒，疫苗稳定性差，保存时间短的技术问题。

本发明的第四个目的在于提供一种山羊痘活疫苗，该疫苗安全有效。

本发明的第五个目的在于提供一种山羊痘活疫苗在山羊痘防控中的应用。

为了解决上述技术问题，特采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种山羊痘病毒的增殖方法，包括以下步骤：

将山羊痘病毒在悬浮培养细胞系上传代驯化，得到驯化病毒；

将细胞系进行悬浮扩大培养；

将驯化病毒接种至扩大培养的细胞系上，经培养得到增殖病毒。

作为进一步技术方案，所述山羊痘病毒为山羊痘病毒AV41株；

所述细胞系包括MDBK、Vero或ST细胞系。

作为进一步技术方案，所述传代驯化包括以下步骤：