[发明专利]基因工程化的NK细胞、其制备方法和用途

权利要求书

1.一种基因工程化的自然杀伤(NK)细胞，所述基因工程化的NK细胞表达抗原嵌合受体，其中，所述抗原嵌合受体由胞外结构域、跨膜结构域和胞内信号结构域组成，其中所述胞外结构域为靶向抗原IGF-1R的抗体，所述靶向抗原IGF-1R的抗体的氨基酸序列为SEQ IDNo:1，所述基因工程化的NK细胞进一步表达靶向抗原IGF-2的抗体，所述靶向抗原IGF-2的抗体的氨基酸序列为SEQ ID No:3。

2.根据权利要求1所述的基因工程化的NK细胞，其中，所述跨膜结构域为CD4跨膜结构域和CD8跨膜结构域中的一种。

3.根据权利要求1或2所述的基因工程化的NK细胞，其中，所述胞内信号结构域为选自由4-1BB和CD3ζ组成的组中的至少一种。

4.根据权利要求1或2所述的基因工程化的NK细胞，其中，所述抗原嵌合受体由所述靶向抗原IGF-1R的抗体、所述靶向抗原IGF-2的抗体、CD8跨膜结构域、4-1BB和CD3ζ串联组成。

5.一种制备根据权利要求1至4中任一项所述的基因工程化的NK细胞的方法，所述方法包括下述步骤：

构建包括编码抗原嵌合受体的胞外结构域、跨膜结构域和胞内信号结构域的基因的载体，其中所述胞外结构域为靶向抗原IGF-1R的抗体，所述靶向抗原IGF-1R的抗体的氨基酸序列为SEQ ID No:1，所述靶向抗原IGF-1R的抗体的的核苷酸编码序列为SEQ ID No:2，

所述载体进一步包括编码表达靶向抗原IGF-2的抗体，所述靶向抗原IGF-2的抗体的氨基酸序列为SEQ ID No:3，并且所述靶向抗原IGF-2的抗体的核苷酸编码序列为SEQ ID No:4；

将所述载体转染至NK细胞，以制备基因工程化的NK细胞；

将所述基因工程化的NK细胞体外培养扩增，得到扩增的基因工程化的NK细胞群体；

收获所述基因工程化的NK细胞群体。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述跨膜结构域为CD4跨膜结构域和CD8跨膜结构域中的一种。

7.根据权利要求5所述的方法，其中，所述胞内信号结构域为选自由4-1BB和CD3ζ组成的组中的至少一种。

8.根据权利要求5所述的方法，其中，所述载体包括编码所述所述靶向抗原IGF-1R的抗体、所述靶向抗原IGF-2的抗体、4-1BB、CD3ζ的胞外结构域和CD8跨膜结构域的基因。

9.根据权利要求5所述的方法，其中，所述NK细胞为NK-92MI细胞、NKL细胞和KHYG细胞中的至少一种。

10.根据权利要求1至4中任一项所述的基因工程化的NK细胞在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途，其中，所述肿瘤过表达抗原IGF-1R，所述肿瘤选自由神经母细胞瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、血性肉瘤、前列腺癌、肝癌、卵巢癌和胃癌组成的组中。