[发明专利]基因工程化的NK细胞、其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种基因工程化的NK细胞、其制备方法和用途。所述基因工程化的NK细胞表达抗原嵌合受体，其中，所述抗原嵌合受体由胞外结构域、跨膜结构域和胞内信号结构域组成，并且其中所述抗原嵌合受体的胞外结构域为靶向抗原IGF‑1R的抗体或其片段，优选纳米抗体Nab1。本发明的基因工程化的NK细胞可杀伤表达IGF‑1R的肿瘤细胞。

技术领域

本发明涉及肿瘤的免疫治疗领域，具体而言，涉及基基因工程化的自然杀伤(NK)细胞、其制备方法和在肿瘤治疗中的用途。

背景技术

在肿瘤治疗领域，嵌合抗原受体T细胞疗法越来越受到人们的关注。

嵌合抗原受体(CAR)是一种人工构建的融合基因编码的跨膜分子，可使T细胞等特异性靶向癌细胞表面的抗原，以消除靶癌细胞。CAR由胞外结构域(比如，抗体的单链抗体，scFv)、跨膜结构域和胞内结构域组成。胞外结构域的scFv负责特异性抗原的识别。胞内结构域负责信号的传导。当胞外结构域和抗原特异性结合之后，胞内结构域启动细胞活化所需的信号，从而促进T细胞的增殖、细胞因子的释放等。跨膜结构域将胞外结构域和胞内结构域连接。

嵌合抗原受体T细胞(CAR T细胞)是被基因改造而具有嵌合抗原受体的T细胞，用于免疫治疗。

但是，对于上述免疫治疗，从患者体内获取T细胞是项繁琐的工作。另外，CART细胞的制备需要数周的时间，而不能满足重症患者的需求。尤其，对于患有严重的淋巴细胞减少症状的患者，从患者体内获取T细胞是不切实际。

鉴于使用CART细胞的免疫治疗的固有限制，近来，人们不断尝试使用CAR改造NK细胞，以克服CAR T细胞的上述限制。CAR改造的NK细胞，即CAR NK细胞，治疗肿瘤越来越受到人们的关注。

CARNK细胞具有的下述许多优势，使其比CART细胞更好：

1、NK细胞的激活不需要事先敏化或进行人类白细胞抗原(HLA)匹配；

2、NK细胞杀伤肿瘤细胞不需要抗原特异性受体；

3、根据老鼠模型以及许多临床研究的结果，与CART细胞相比，CARNK细胞免疫疗法的严重副作用更少；

4、存在可以使用的功能性NK细胞，例如NK-92MI；

5、可以从外周血中获得足够的NK细胞；

6、CARNK细胞可以潜在地用作“现成的”通用CAR产品。

总之，CARNK细胞疗法是一种有前途的免疫疗法，它将在未来发挥关键作用。

研究表明，胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)在许多中肿瘤细胞，比如，神经母细胞瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、膀胱癌、血性肉瘤、前列腺癌、肝癌、卵巢癌、胃癌等中异常高表达。

IGF-1R是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体糖蛋白。它由四个亚单位组成，即两个胞外α亚单位，以及两个具有跨膜和胞内部分的β亚单位。IGF-1R的α亚单位与配体结合而激活β亚单位的酪氨酸激酶的活性。

胰岛素生长因子(IGF)信号通路被与IGF-1R结合的胰岛素生长因子1(IGF1)、胰岛素生长因子2(IGF-2)和/或胰岛素激活，接着IGF-1R自磷酸化而开始下游级联反应，比如PI3K和MAPK，从而促进细胞增殖和分化，并发挥抗凋亡作用和血管生成。

因此，阻断IGF-1R和IGF-2的结合也成为抑制肿瘤生长的一种有希望的靶点。

发明内容

鉴于上述，为了提供更有效的治疗过表达IGF-1R的肿瘤，本发明提供了一种基因工程化的自然杀伤(NK)细胞，其制备方法和抑制肿瘤的方法，以更有效地治疗过表达IGF-1R的肿瘤。