[发明专利]一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中霉酚酸及其代谢物的试剂盒

说明书

一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中霉酚酸及其代谢物的试剂盒，所述待测物分别为：MPA以及MPA的代谢物MPAG和MPAAG；试剂盒包括如下试剂：洗脱液，包括洗脱液A和洗脱液B、混合标准品储备液、混合内标溶液、蛋白质沉淀剂和质控品；采用本发明的试剂盒检测血浆中霉酚酸及其代谢物时，前处理过程简单，成本低，且灵敏度高、特异性强，3.0min之内完成霉酚酸及其代谢物的分离和检测，基质效应与精密度基本满足要求，可用于临床上霉酚酸及其代谢物的定量分析，为临床上霉酚酸及其代谢物的治疗浓度监测提供一种可靠的检测方法。

技术领域

本发明属于血液检测技术领域，更具体的是涉及一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中霉酚酸及其代谢物的试剂盒。

背景技术

霉酚酸(Mycophenolic acid,MPA)为免疫抑制剂霉酚酸脂(mycophenolatemofetil,MMF)在体内的活性代谢物，临床上用于预防器官移植后的免疫排斥反应，治疗同种异体肾移植后难治性排异反应。霉酚酸在体内代谢会生成霉酚酸葡萄糖苷(Mycophenolic acid glucuronide,MPAG)，MPGA无药理活性，经过肠道循环可以重新生成MPA，重新吸收后进入体内，再次发挥作用，但MPAG可能影响MPA的蛋白结合率，MPA代谢还可以生成霉酚酸酰基葡萄糖苷(Mycophenolic acid acyl-β-glucuronide,MPAAG)，MPAAG与MPA的某些毒副作用有关。因此同时测定MPA、MPAG和MPAAG有利于更好地掌握MPA的药动学特征，有助于提高疗效并减少不良反应。

目前，国内外报道的霉酚酸的血药浓度测定方法都以高效液相色谱法、酶联免疫法为主，但这些方法往往特异性不强，灵敏度较低，基质干扰大，检测时间长，难以普及应用；迄今为止，尚未见到一种能够检测血浆中霉酚酸及其代谢物的有效方法及试剂盒的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中霉酚酸及其代谢物的试剂盒，所述霉酚酸及其代谢物分别为：霉酚酸(MPA)，霉酚酸葡萄糖苷(MPAG)，霉酚酸酰基葡萄糖苷(MPAAG)；

上述霉酚酸及其代谢物对应的同位素内标物为：霉酚酸-d3(MPA-d3)；

所述试剂盒包括如下试剂：

洗脱液：洗脱液A：水(含0.01～0.5％甲酸，1-10mM甲酸铵)；洗脱液B：甲醇(含0.01～0.5％甲酸，1-10mM甲酸铵)；

混合标准品储备液：含有MPA、MPAG和MPAAG的甲醇溶液；

混合内标溶液：含有MPA-d3的甲醇溶液；

蛋白质沉淀剂：甲醇；

质控品：含有霉酚酸及其代谢物的空白血浆基质溶液，分为低、中、高三个浓度，分别为QC(L)、QC(M)和QC(H)，其中，

QC(L)为QC(M)用无干扰血浆基质溶液稀释至10倍；

QC(M)为上述混合标准溶液用无干扰血浆基质溶液稀释至200倍；

QC(H)为上述混合标准溶液用无干扰血浆基质溶液稀释至50倍。

其中，所述血浆为人或动物血浆。

其中，所述洗脱液A为含有0.1％甲酸，4mM甲酸铵的水溶液；所述洗脱液B为含有0.1％甲酸，4mM甲酸铵的甲醇溶液。

其中，所述的空白血浆基质为不含霉酚酸及其代谢物的空白血浆。

其中，所述的混合标准品储备液为含有MPA 300000ng/mL、MPAG 3000000ng/mL、MPAAG 30000ng/mL的甲醇溶液。