[发明专利]一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法

权利要求书

1.一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法，其特征在于，所述3种脂质分别为：α-HB、OA和LGPC；

采用超高效液相色谱串联质谱法检测预处理的血浆中的脂质的含量，先利用超高效液相色谱将目标待测物与血浆基质中的干扰组分进行分离，再利用质谱同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出3种脂质的含量；

(1)色谱条件：

流动相A：含0.01～0.5％甲酸的水；

流动相B：乙腈；

色谱柱：ACQUITYUPLC BEH C18(2.1×50mm,1.7μm)；

采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，见表1；

流速为0.3～0.6mL/min，柱温为40～60℃，进样体积为0.5～5μL；

表1 流动相梯度洗脱参数

(2)质谱条件：在电喷雾电离检测模式下，多反应监测(MRM)的质谱扫描模式；喷雾电压为3.0kV(ESI+)及2.5kV(ESI-)；源温度：120℃；雾化气温度：400℃，雾化气流速：800L/h，锥孔气流速：150L/h；同时监测目标物对应的标准品和内标母离子、子离子、去簇电压和碰撞电压，参数见表2；

表2 质谱检测参数

2.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法，其特征在于，所述血浆为人或动物血浆。

3.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法，其特征在于，所述经过预处理的血浆按照如下方法制备：向血浆加入混合内标工作液，涡旋后加入蛋白沉淀剂，再涡旋离心后取上清液。

4.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法，其特征在于，所述的标准品按照如下步骤制备得到：

称取各待测物标准品，将α-HB、OA加入甲醇溶解，LGPC加入氯仿完全溶解，配制成浓度依次为α-HB 20mM、OA 100mM、LGPC 200mM的标准品母液，然后分别移取α-HB 200μL、OA200μL、LGPC 400μL，加入200μL甲醇溶液，充分混匀得到1mL混合标准品储备液；

将上述混合标准品储备液以空白血浆基质配制成七个不同浓度点的校准品溶液，取10μL混合标准品储备液至1.5mL离心管中，加入190μL空白血浆基质得到第一个高值浓度点(S7)，取第一高值浓度点(S7)用等体积空白血浆基质稀释得第二高值浓度点(S6)；取第一高值浓度点(S7)用4倍体积空白血浆基质稀释得第三高值浓度点(S5)；取第二高值浓度点(S6)用4倍体积空白血浆基质稀释得第四高值浓度点(S4)；取第三高值浓度点(S5)用4倍体积空白血浆基质稀释得第五高值浓度点(S3)；取第四高值浓度点(S4)用4倍体积空白血浆基质稀释得第六高值浓度点(S2)；取第五高值浓度点(S3)用4倍体积空白血浆基质稀释得第七高值浓度点(S1)。

5.根据权利要求3所述的一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法，其特征在于，所述的混合内标工作液按如下方法制备得到：称取各同位素内标物，将α-HB-d3、OA-13C18加入甲醇溶解，LGPC-d9加入氯仿溶解，配制成浓度依次为50mM、100mM、200mM的同位素内标母液；然后分别移取α-HB-d34μL、OA-13C1810μL、LGPC-d920μL，加入甲醇966μL，充分混匀得到1mL混合内标溶液；取100μL混合内标溶液，加入900μL甲醇，混合均匀得混合内标工作液。

6.根据权利要求3所述的一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法，其特征在于，所述的经过预处理的血浆按照如下方法制备：取20μL血浆于1.5mL离心管中，向其中加入20μL混合内标工作液，涡旋后加入760μL蛋白沉淀剂，在12000～15000r/min，10～20℃离心4～10min后，取70μL上清液。