[发明专利]一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法

说明书

本发明公开了一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法，所述3种脂质分别为：α‑HB、OA和LGPC；采用超高效液相色谱串联质谱法检测预处理的血浆中的脂质的含量，先利用超高效液相色谱将目标待测物与血浆基质中的干扰组分进行分离，再利用质谱同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出3种脂质的含量；采用本发明的技术方案，将血浆样本与所有待测物的混合内标溶液混合，样本无需衍生化处理，前处理简单，只需一步蛋白沉淀处理，样本用量小，灵敏度高，特异性强，5.0分钟之内可同时检测3种脂质，可用于临床上血浆脂质的诊断及健康评估。

技术领域

本发明属于血液检测技术领域，更具体的是涉及一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法。

背景技术

糖尿病是一种最常见的内分泌代谢疾病，具有遗传易感性，在环境因素的出发下发病。随着社会经济的发展、人们生活方式的改变及人口老龄化，2型糖尿病占糖尿病总体人群95％以上,患病率高,起病隐匿,早期症状不明显,2型糖尿病发病率在全球范围内呈逐年增高趋势，尤其在发展中国家增加速度更快，呈流行势态。糖尿病现已成为继心血管冰和肿瘤之后，第三位威胁人类生命健康的非传染性疾病。

2型糖尿病流行病学主要调查其患病率。但是，通过改变生活方式、适当的营养管理和/或治疗干预，可以延迟或预防糖尿病前期到显性2型糖尿病的进展。因此，早期发现糖尿病前期是控制糖尿病流行的关键。目前糖尿病前期的定义是使用一个或多个基于血糖的检测标准，包括空腹血糖(FPG)、血红蛋白A1c和2小时血糖。但是这些检测标准反应里导致2型糖尿病的不同病理生理状态，可能只在有限的受试群体中检测到糖尿病前期。为了更准确的诊断糖尿病前期状态，如胰岛素抵抗(IR)和糖耐受量受损(IGT)，有必要识别和量化疾病特异性生物标志物。

目前有研究表明有三种脂质，包括α-羟基丁酸(2-hydroxybutyric acid，α-HB)、油酸(oleic acid，OA)和亚油酰甘油磷酸胆碱(1-linoleoylglycerophosphocholine，L-GPC)与胰岛素测量作为胰岛素抗体(IR)的生物标志物，但关于如何对其进行共同检测，目前所做研究还较少，因此有必要研究开发一种简单、高效且可靠的血浆中α-HB、OA和LGPC的检测方法，满足临床应用的需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法，所述3种脂质分别为：α-羟基丁酸(α-HB)、油酸(OA)和亚油酰甘油磷酸胆碱(LGPC)；

上述3种脂质对应的同位素内标物分别为：α-羟基丁酸-d3(α-HB-d3)、油酸-13C18(OA-13C18)和亚油酰甘油磷酸胆碱-d9(LGPC-d9)；

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中3种脂质的方法，所述3种脂质分别为：α-HB、OA和LGPC；

采用超高效液相色谱串联质谱法检测预处理的血浆中的脂质的含量，先利用超高效液相色谱将目标待测物与血浆基质中的干扰组分进行分离，再利用质谱同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出血浆中3种脂质的含量；

(1)具体色谱条件：

流动相A：含0.01～0.5％甲酸的水；

流动相B：乙腈；

色谱柱：ACQUITYUPLC BEH C18(2.1×50mm,1.7μm)；

采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，见表1；

流速为0.3～0.6mL/min，柱温为40～60℃，进样体积为0.5～5μL；

表1流动相梯度洗脱参数