[发明专利]猪圆环病毒1到4型四重实时荧光PCR鉴别检测方法

权利要求书

1.猪圆环病毒1到4型四重实时荧光PCR鉴别检测方法，其特征是，包括以下步骤：

1）针对不同基因型PCV的ORF1和ORF2基因设计能鉴别PCV1,PCV2,PCV3和PCV4的特异性引物和探针序列；

2）用不同荧光素标记的PCV1-4毒株的探针，每条探针可用任意一种荧光素标记，且四种探针标记的必须是通过不同检测通道检测的荧光素，均可选自FAM、VIC、HEX、JOE、NED、TAMRA、CY3、ROX或CY5荧光素；

3）将分别用于检测PCV1-4毒株的上述引物和探针，或者用于鉴别PCV1-4毒株的上述引物和探针，置于同一个反应管中，使用荧光PCR扩增仪进行实时荧光PCR反应。

2.根据权利要求1所述的猪圆环病毒1到4型四重实时荧光PCR鉴别检测方法，其特征是，所述引物为四种引物对，包含八条引物序列，其中，

PCV1引物对包含PCV1-F2020: AACCCCATAAGAGGTGGGTGTT和PCV1-R2020：TTCTACCCTCTTCCAAACCTTCCT的核苷酸序列；

PCV2引物对包含PCV2-F2020: CTGAGTCTTTTTTATCACTTCGTAATGGT和PCV2-R2020：ACTGCGTTCGAAAACAGTATATACGA的核苷酸序列；

PCV3引物对包含PCV3-F2020: CATAAATGCTCCAAAGCAGTGCT和PCV3-R2020：TCACCCAGGACAAAGCCTCTT的核苷酸序列；

PCV4引物对包含PCV4-F2020: ATTATTAAACAGACTTTATTTGTGTCATCACTT和PCV4-R2020：ACAGGGATAATGCGTAGTGATCACT的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的猪圆环病毒1到4型四重实时荧光PCR鉴别检测方法，其特征是，所述探针为四条探针，包含：

PCV1的探针PCV1-P2020：TCCGAGGAGGAGAAAAACAAAATACGGGA的核苷酸序列；

PCV2的探针PCV2-P2020：TTAAGTGGGGGGTCTTTAAGATTAAATTCTCTGAATTGT的核苷酸序列；

PCV3的探针PCV3-P2020：ATATGTGTTGAGCCATGGGGTGGGTCT的核苷酸序列；

PCV4的探针PCV4-P2020：ATACTACACTTGATCTTAGCCAAAAGGCTCGTTGA的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的猪圆环病毒1到4型四重实时荧光PCR鉴别检测方法，其特征是，将引物和探针的组合物制备成试剂盒用于鉴别检测。