[发明专利]通过测定外周血中性粒细胞中蛋白的表达来鉴定烟碱暴露的潜在生物标志物的方法

说明书

本发明公开了一种通过测定外周血中性粒细胞中蛋白的表达来鉴定烟碱暴露的潜在生物标志物的方法，所述方法包括：基于条件性位置偏爱(CPP)装置建立大鼠烟碱CPP获得模型，最终获得无烟碱摄入大鼠和烟碱依赖大鼠；分别从获得的两组大鼠中提取外周血，提取外周血中性粒细胞的总蛋白；通过Western Blotting分别检测获得的两组总蛋白中特定蛋白的表达；通过统计学分析检测得到的特定蛋白的表达在两组之间是否具有显著性差异，当具有显著性差异时，所述蛋白被鉴定为烟碱暴露的潜在生物标志物。本方法可模拟吸烟依赖和不吸烟的两种吸烟状态，对外周血中性粒细胞中蛋白水平进行测定，对于烟碱暴露生物标志物的相关研究具有较高应用价值。

技术领域

本发明属于生命科学研究领域，具体而言涉及一种基于模拟吸烟成瘾和不吸烟的两种吸烟状态的大鼠模型，通过检测特定蛋白的表达来鉴定烟碱暴露的潜在生物标志物的方法。

背景技术

在致瘾性药物的研究过程中，动物成瘾模型的构建起关键作用。条件性位置偏爱(conditioned place preference,CPP)是1979年建立并逐步完善的用于检测药物依赖性的经典行为学实验方法，通过训练使动物建立药物奖赏效应与某种特定环境之间的联系，通过测定动物对给予药物奖赏的环境是否产生偏爱，来评价动物对药物的渴求程度。

烟碱(尼古丁)是烟草中含量最高的生物碱，具有重要的药理学活性，也是烟草烟气中主要致瘾物质。因此，可以考虑尝试建立烟碱成瘾的动物模型，通过模拟吸烟成瘾和不吸烟的两种吸烟状态，来鉴定烟碱暴露相关的生物标志物。

发明内容

本发明的目的是建立一种烟碱成瘾的动物模型，通过模拟吸烟成瘾和不吸烟的两种吸烟状态来鉴定烟碱暴露的潜在生物标志物的方法。特别是，该方法基于模拟吸烟成瘾和不吸烟两种不同吸烟状态的大鼠模型的外周血中性粒细胞中的蛋白表达情况，通过统计学分析发现可能存在的烟碱暴露的潜在生物标志物。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明提供一种通过测定外周血中性粒细胞中蛋白的表达来鉴定烟碱暴露的潜在生物标志物的方法，所述方法包括：基于条件性位置偏爱(CPP)装置建立大鼠烟碱获得模型，最终获得无烟碱摄入大鼠和烟碱依赖大鼠，检测两种大鼠的外周血中性粒细胞中蛋白的表达，当所述蛋白的表达在两种大鼠之间具有显著性差异时，即被鉴定为烟碱暴露的潜在生物标志物。

本发明提供的方法包括以下步骤：

1)基于条件性位置偏爱(CPP)装置建立大鼠烟碱CPP获得模型，最终获得无烟碱摄入大鼠和烟碱依赖大鼠；

2)分别从步骤1)获得的两组大鼠中提取外周血，进一步提取外周血中性粒细胞的总蛋白；

3)通过Western Blotting分别检测步骤2)获得的两组总蛋白中特定蛋白的表达；

4)分析步骤3)检测得到的特定蛋白的表达在两组之间是否具有显著性差异，当具有显著性差异时，所述蛋白被鉴定为烟碱暴露的潜在生物标志物。

优选地，所述步骤1)包括：

将大鼠随机分成实验组和对照组，每组大鼠的数量≥8只；

每2天1个给药周期，在奇数日对实验组大鼠皮下注射烟碱溶液，给药剂量为0.6mg/kg，对照组大鼠注射相同体积的生理盐水，注射后立即放入CPP装置的白箱中让大鼠自由活动40min，然后放回笼中常规饲养；在偶数日对实验组和对照组的大鼠均皮下注射相同体积的生理盐水，注射后立即放入CPP装置的黑箱中让大鼠自由活动40min，然后放回笼中常规饲养；

在开始给药后的第11天开始进行CPP测试，测试时间为当日注射烟碱溶液之前，所述测试包括：将各组的大鼠分别放入CPP箱中并去掉两侧隔板，使其在两侧黑白箱中自由活动10min，记录其在白箱中停留的时间；