[发明专利]一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的方法

权利要求书

1.一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的方法，其特征在于，所述的有机酸分别为：HA、HBA、HPA、IAA、TCA、XA、β-HIVA、SA、EMA、PYA、CA、SCA、HMGA、MDA、PGA、GA、α-HB、HVA、VMA、HIA和KA；

采用超高效液相色谱串联质谱法检测预处理的尿液中有机酸的含量，先利用超高效液相色谱将目标待测物与尿液基质中的干扰组分进行分离，再利用质谱同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出尿液中21种有机酸的含量；

(1)色谱条件：

流动相A：含0.01～0.5％甲酸的水；流动相B：乙腈；

色谱柱：ACQUITYUPLC BEH C18(2.1×100mm,1.7μm)；

采用流动相A和流动相B为混合流动相进行梯度洗脱，见表1；

流速为0.2～0.5mL/min，柱温为35～45℃，进样体积为1～10μL；

表1流动相梯度洗脱参数

(2)质谱条件：电喷雾电离(ESI)模式下，采用多反应监测(MRM)进行负离子扫描；喷雾电压为2.5kV(ESI-)；源温度：120℃；雾化气温度：400℃，雾化气流速：800L/h，锥孔气流速：150L/h；同时监测目标物对应的标准品和内标母离子、子离子、去簇电压和碰撞电压，参数见表2；

表2质谱检测参数

2.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的方法，其特征在于，所述尿液为人或动物尿液。

3.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的方法，其特征在于，所述预处理的尿液按照如下方法制备：尿液样品离心后取上清液过滤，在滤液中加入混合内标工作液，涡旋混匀后加入稀释液稀释，待进样。

4.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的方法，其特征在于，所述的标准品按照如下步骤制备得到：

分别将各待测物标准品用甲醇配制成标准品母液，浓度分别为：HA 10mg/mL、HBA 5mg/mL、HPA 10mg/mL、IAA 5mg/mL、TCA 5mg/mL、XA 10mg/mL、β-HIVA5 mg/mL、SA4 mg/mL、EMA5mg/mL、PYA 5mg/mL、CA 10mg/mL、SCA 5mg/mL、HMGA 5mg/mL、MDA 5mg/mL、PGA 5mg/mL、GA10mg/mL、α-HB 5mg/mL、HVA 2mg/mL、VMA4 mg/mL、HIA 4mg/mL和KA 5mg/mL，然后再以甲醇水溶液配制成包含有HA 1000μg/mL、HBA 50μg/mL、HPA 250μg/mL、IAA 250μg/mL、TCA 5μg/mL、XA 25μg/mL、β-HIVA 100μg/mL、SA 100μg/mL、EMA 250μg/mL、PYA 250μg/mL、CA 2500μg/mL、SCA 100μg/mL、HMGA 100μg/mL、MDA 50μg/mL、PGA 5μg/mL、GA 1000μg/mL、α-HB 100μg/mL、HVA 100μg/mL、VMA 100μg/mL、HIA 100μg/mL和KA 50μg/mL的混合标准品储备液；

取40μL混合标准溶液加入至160μL 0.3％甲酸水溶液中作为第一个高值浓度点；取第一高值浓度点用等体积0.3％甲酸水溶液稀释得第二高值浓度点；取第一高值浓度点用4倍体积0.3％甲酸水溶液稀释得第三高值浓度点；取第二高值浓度点用4倍体积0.3％甲酸水溶液稀释得第四高值浓度点；取第三高值浓度点用4倍体积0.3％甲酸水溶液稀释得第五高值浓度点；取第四高值浓度点用4倍体积0.3％甲酸水溶液稀释得第六高值浓度点；取第五高值浓度点用4倍体积0.3％甲酸水溶液稀释得第七高值浓度点。