[发明专利]一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的方法

说明书

本发明公开了一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的方法，所述的有机酸分别为：HA、HBA、HPA、IAA、TCA、XA、β‑HIVA、SA、EMA、PYA、CA、SCA、HMGA、MDA、PGA、GA、α‑HB、HVA、VMA、HIA和KA；采用超高效液相色谱串联质谱法检测预处理的尿液中有机酸的含量，利用质谱同位素内标法定量，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物峰面积比为Y轴，建立校准曲线，计算出尿液中21种有机酸的含量；本发明将尿液样本与所有待测物的混合内标溶液混合，样本无需衍生化处理，前处理简单，样本用量小，灵敏度高，特异性强，检测种类较多，5.0分钟之内可同时检测21种有机酸，可用于临床上尿液有机酸的诊断及健康评估。

技术领域

本发明属于尿液检测技术领域，更具体的是涉及一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的方法。

背景技术

有机酸是指一些具有酸性的有机化合物，是身体代谢产生的一大类化合物。它们来着膳食蛋白质，脂肪和碳水化合物，大部分有机酸直接参与生物化学反应，有机酸被身体用于产生细胞能量并提供细胞功能所需的营养。同时，有机酸具有抑菌、消炎、抗病毒、抗突变、抗癌等作用，有的能够增加灌装动脉血流量、抑制脑组织脂质过氧化物生成、软化血管、促进钙和铁的吸收，有的具有帮助胃消化脂肪和蛋白质；有的则具有预防疾病和促进新城代谢的作用，从而有益于人体的健康。所以，尿液中有机酸测试，可以作为代谢异常的一个重要诊断指标。代谢失衡是一种常见且普遍的疾病，可能是许多慢性疾病的基础，例如疲劳，胃肠功能障碍，肌肉/关节问题，情绪障碍和头痛。这些疾病通常对长期治疗和持续改善有抵抗力。有机酸分析传统上可以用于早期检测/排除或监测代谢障碍。尿液样本可用于评估肠道，肝脏和神经系统健康以及能量代谢和营养缺乏。

人体摄入的蛋白质、脂肪和碳水化合物，被用于产生细胞能量和提供细胞功能所需要的营养，但食物中同时也应该包括其它必要的营养素，只有在这些必要营养素的帮助下食物才能转化为能量和营养被人体吸收。当食物代谢时，某些必要营养素的缺乏会导致能量生成和营养吸收的通路受阻，同时产生的有机酸代谢产物就会排入尿液中。因此通过尿液中有机酸的测定可以评估个体能量代谢情况和特定的营养素是否缺乏。对于测量的许多有机酸，尿中异常高的水平通常表明特定的代谢通路被阻碍，该代谢通路所必需的营养素水平较低。尿液有机酸测试有助于理解营养素代谢的执行方式，并确定代谢周期可能存在不平衡的地方。

目前针对抗尿液中有机酸浓度检测的方法主要为超高效液相-串联质谱法或气相色谱-串联质谱法，文献报道的多为一次性针对1-3种有机酸进行检测，比如中国专利申请(公开号：CN103837624A)公开了“一种尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的液相色谱串联质谱测定方法”，一次仅检测两种有机酸，而尿液中有机酸种类繁多，检测过程繁琐。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种超高效液相色谱串联质谱技术检测尿液中21种有机酸的方法，所述21种有机酸分别为：马尿酸(HA)、4-羟基苯甲酸(HBA)、4-羟苯基乙酸(HPA)、吲哚乙酸(IAA)、丙三羧酸(TCA)、黄尿酸(XA)、β-羟基异戊酸(β-HIVA)、辛二酸(SA)、乙基丙二酸(EMA)、丙酮酸(PYA)、柠檬酸(CA)、琥珀酸(SCA)、羟甲基戊二酸(HMGA)、杏仁酸(MDA)、苯基乙醛酸(PGA)、葡萄糖酸(GA)、α-羟基丁酸(α-HB)、高香草酸(HVA)、香草基扁桃酸(VMA)、5-羟基吲哚乙酸(HIA)和犬尿喹啉酸(KA)；

上述21种有机酸对应的同位素内标物分别为：马尿酸-d5(HA-d5)、4-羟基苯甲酸-d4(HBA-d4)、吲哚乙酸-d3(IAA-d3)、黄尿酸-d4(XA-d4)、柠檬酸-d4(CA-d4)、琥珀酸-d4(SCA-d4)、苯基乙醛酸-d4(PGA-d4)、α-羟基丁酸-d3(α-HB-d3)、高香草酸-d3(HVA-d3)、香草基扁桃酸-d3(VMA-d3)、5-羟基吲哚乙酸-d5(HIA-d5)和犬尿喹啉酸-d5(KA-d5)；