[发明专利]一种DNA提取试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种DNA提取试剂盒，其特征在于，由以下成分组成：红细胞裂解液、白细胞裂解液、蛋白酶K溶液、醋酸铵溶液、无水乙醇、75％乙醇和TE溶液；

所述红细胞裂解液每升含有：氯化铵2-20g，碳酸氢钾0.1-5g，乙二胺四乙酸二钠0.1-1g，溶剂为去离子水；

所述白细胞裂解液为质量百分含量为0.5-5％的十二烷基硫酸钠水溶液；

所述蛋白酶K溶液中蛋白酶K的浓度为0.05-2.00mg/L；

所述醋酸铵溶液中醋酸铵浓度为2.5-10mol/L；

所述75％乙醇为乙醇的体积百分含量为75％的乙醇水溶液。

2.根据权利要求1所述的DNA提取试剂盒，其特征在于，所述红细胞裂解液pH值7.0-8.0。

3.根据权利要求1所述的DNA提取试剂盒，其特征在于，所述TE溶液为含有Tris-HCl和EDTA的水溶液，pH值8.0，Tris-HCl浓度为1mol/L，EDTA浓度为0.5mol/L。

4.一种DNA提取方法，其特征在于，使用权利要求1-3任一所述的DNA提取试剂盒完成。

5.根据权利要求4所述的DNA提取方法，其特征在于，全血样本先用红细胞裂解液去除无核成分，再加入白细胞裂解液和蛋白酶K裂解细胞并释放核酸，最后采用醋酸铵溶液、无水乙醇、75％乙醇和TE溶液去除杂质，获得DNA提取产物。

6.根据权利要求5所述的DNA提取方法，其特征在于，具体包括如下操作步骤：

(1)取全血样本放置于离心管内，加入红细胞裂解液，混匀，放置，再离心弃上清，得沉淀；

(2)沉淀中加入蛋白酶K溶液和白细胞裂解液，重悬沉淀，65℃水浴10min；

(3)加入醋酸铵溶液，混匀，离心，取上清，再加入预冷的无水乙醇，混匀、室温放置，然后离心，弃上清，得沉淀；

(4)步骤(3)的沉淀中加入75％乙醇，混匀，离心，弃上清，得沉淀；

(5)步骤(4)的沉淀室温晾至乙醇挥发完毕，再加入TE溶液，重悬后65℃水浴5min，离心使溶液集中至管底，即为DNA提取产物。

7.根据权利要求6所述的DNA提取方法，其特征在于，所述全血样本使用量为200μL。

8.根据权利要求6所述的DNA提取方法，其特征在于，所述全血样本为新鲜的人类外周血经EDTAK2/K3抗凝处理后的样本。