[发明专利]一种DNA提取试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种DNA提取试剂盒及提取方法，试剂盒由以下成分组成：红细胞裂解液、白细胞裂解液、蛋白酶K溶液、醋酸铵溶液、无水乙醇、75％乙醇和TE溶液。提取方法是全血样本先用红细胞裂解液去除无核成分，再加入白细胞裂解液和蛋白酶K裂解细胞并释放核酸，最后采用醋酸铵溶液、无水乙醇、75％乙醇和TE溶液去除杂质，获得DNA提取产物。该试剂盒成分简单，无有毒有害成分，所需样品少，提取效果好；提取方法操作简单、快速，不需要特殊器材辅助，仅使用离心管和离心机即可完成，整个提取过程只需要40分钟即可完成；所提取的DNA产物浓度和纯度均符合要求。

技术领域

本发明核酸提取技术领域，具体涉及一种DNA提取试剂盒及提取方法。

背景技术

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)，广泛存在于所有动植物、微生物及生物体内。随着分子生物学的发展，核酸检测的广泛应用，核酸的提取纯化是各种分子生物学研究和临床检测的基础。人类血液样本由于其在临床上取样简单易得，是分子生物学研究和临床检测中最常用的人体样本之一。快速而有效的人类血液DNA提取纯化有助于临床体外检测。

现有的核酸提取方法主要包括苯酚氯仿抽提法、离心柱法、磁珠法。其中，苯酚氯仿抽提法是最经典的方法，但是操作复杂耗时，且含有有害有机溶剂，对人体有害，易污染环境；离心柱法和磁珠法是目前比较常用的方法，但是涉及特殊的吸附柱或磁力吸附仪器而导致操作复杂且成本较高。

随着核酸检测的广泛应用，核酸提取纯化技术也在发展，国内外已有各种人类血液核酸提取试剂盒推出。目前这些核酸提取纯化试剂盒存在操作复杂、需要特殊仪器或者器材，成本高，甚至有害等不利于生物学研究和临床检测应用。因此，需要一种简单、快速、无有害试剂、无需任何特殊器材和仪器的人类血液DNA提取试剂盒，使其产物可适用于临床体外检测。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述多种问题，本发明提供了一种DNA提取试剂盒，能够简单、快速、有效地提取人类血液DNA，提取时间短，且不含有害成分，也无需特殊器材或仪器辅助。本发明还提供了一种DNA提取方法。

本发明提供的DNA提取试剂盒，由以下成分组成：红细胞裂解液、白细胞裂解液、蛋白酶K溶液、醋酸铵溶液、无水乙醇、75％乙醇和TE溶液；

所述红细胞裂解液每升含有：氯化铵2-20g，碳酸氢钾0.1-5g，乙二胺四乙酸二钠0.1-1g，溶剂为去离子水；

所述白细胞裂解液为质量百分含量为0.5-5％的十二烷基硫酸钠水溶液；

所述蛋白酶K溶液中蛋白酶K的浓度为0.05-2.00mg/L；

所述醋酸铵溶液中醋酸铵浓度为2.5-10mol/L；

所述75％乙醇为乙醇的体积百分含量为75％的乙醇水溶液。

本方法采用十二烷基硫酸钠和蛋白酶K相结合使细胞裂解，降解蛋白和核酶。加入醋酸铵有两个作用，一方面能够促使部分蛋白沉淀，另一方面提供适当的盐离子促使乙醇中的DNA沉淀。本方法在提供醋酸铵和乙醇的环境下，通过离心就能使DNA沉淀，因此无需使用吸附柱。采用十二烷基硫酸钠和蛋白酶K降解蛋白，醋酸铵乙醇除去蛋白等杂质，足以提供高纯度DNA，避免了采用苯酚氯仿等有害试剂。

优选的，上述DNA提取试剂盒中，所述红细胞裂解液pH值7.0-8.0。

优选的，上述DNA提取试剂盒中，所述TE溶液为含有Tris-HCl和EDTA的水溶液，pH值8.0，Tris-HCl浓度为1mol/L，EDTA浓度为0.5mol/L。

本发明提供的DNA提取方法，使用以上任一所述的DNA提取试剂盒完成。