[发明专利]谷胱甘肽的检测方法

权利要求书

1.谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，包括：

制备至少三种浓度的标准溶液，其中，所述标准溶液为具有谷胱甘肽和内标物的溶液，所述至少三种浓度的标准溶液中内标物的量相同；

利用液质联用仪在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液，获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果；

根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中谷胱甘肽的浓度和内标物的浓度，拟合谷胱甘肽对应的标准曲线方程；

向待处理样品内加入所述内标物和沉淀蛋白试剂，涡旋混匀，并高速离心，取上清液作为待测样品；

利用液质联用仪在预设的检测条件下检测所述待测样品，获得所述待测样品的第二检测结果；

基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测样品中谷胱甘肽的浓度。

2.根据权利要求1所述的谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，

所述检测条件中的液相条件包括：

长度为50mm、内径为2.1mm以及填料粒径为3μm的色谱柱；

洗脱流动相为1-10mmol/L的甲酸铵的水溶液和甲醇，其中，甲酸铵的水溶液中含有体积比为0.05％-0.25％的甲酸；

柱温为30-50℃；

流速为0.2-0.4mL/min。

3.根据权利要求2所述的谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，

所述洗脱流动相采用等度洗脱；

甲酸铵的水溶液与甲醇的体积比为：95:5。

4.根据权利要求1所述的谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，

所述检测条件中的质谱条件包括：

采用电喷雾电离源，正离子扫描模式，平行反应监测模式，喷针位置：C，离子轨道阱分辨率：35000-70000；离子透镜射频电压：50.0；鞘气流速：40psi；辅助气流速：8arb；离子源加热温度：300℃；离子传输管温度：300℃；喷雾电压：4.50KV。

5.根据权利要求1所述的谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，

当所述标准溶液中的谷胱甘肽包括氧化型谷胱甘肽时，所述内标物包括：氧化型谷胱甘肽对应的第一内标物；

氧化型谷胱甘肽对应的所述标准曲线方程的两个变量分别为：氧化型谷胱甘肽的色谱峰面积与所述第一内标物对应的色谱峰面积的比值，以及所述标准溶液中氧化型谷胱甘肽的浓度与所述第一内标物的浓度的比值。

6.根据权利要求1所述的谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，

当所述标准溶液中的谷胱甘肽包括还原型谷胱甘肽时，所述内标物包括：还原型谷胱甘肽对应的第二内标物；

还原型谷胱甘肽对应的所述标准曲线方程的两个变量分别为：还原型谷胱甘肽的色谱峰面积与所述第二内标物对应的色谱峰面积的比值，以及所述标准溶液中还原型谷胱甘肽的浓度与所述第二内标物的浓度的比值。

7.根据权利要求5所述的谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，

所述第一内标物包括氧化型谷胱甘肽的同位素-¹³C₄¹⁵N₂。

8.根据权利要求6所述的谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，

所述第二内标物包括还原型谷胱甘肽的同位素-¹³C₂¹⁵N。

9.根据权利要求1所述的谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，

所述沉淀蛋白试剂包括：2％-10％磺基水杨酸；

和/或，

所述标准溶液中的稀释液为0.05％-0.2％的甲酸水溶液，其中，所述甲酸水溶液中含有10mg/mL的维生素C。

10.根据权利要求1至9中任一所述的谷胱甘肽的检测方法，其特征在于，

所述向待处理样品内加入所述内标物和沉淀蛋白试剂，涡旋混匀，并高速离心，取上清液作为待测样品，包括：

将待处理样品超声2-10min，加入所述内标物，混匀，再加入沉淀蛋白试剂，在1500-2000rpm的转速下涡旋混合2-5min，顺次在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min。