[发明专利]谷胱甘肽的检测方法

说明书

本发明提供了谷胱甘肽的检测方法，包括：制备具有谷胱甘肽和内标物的至少三种浓度的标准溶液，标准溶液中内标物的量相同；利用液质联用仪检测每一种标准溶液并获得第一检测结果；根据各个第一检测结果、标准溶液中谷胱甘肽的浓度，拟合谷胱甘肽分别对应的标准曲线方程；向待处理样品内加入内标物和沉淀蛋白试剂，涡旋混匀，并高速离心，取上清液作为待测样品；利用液质联用仪进行检测获得待测样品的第二检测结果；基于标准曲线方程和第二检测结果，得到待测样品中谷胱甘肽的浓度。本方案能够缩短样品检测时间。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及谷胱甘肽的检测方法。

背景技术

谷胱甘肽是由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成且含有巯基的三肽，几乎存在于身体的每一个细胞，有还原型(GSH)和氧化型(GSSG)两种形式。

目前，机体内谷胱甘肽含量测定的方法通常采用高效液相色谱法。但是，采用高效液相色谱法检测，通常需要对待测样品进行较复杂的前处理，耗费时间较多，从而导致样品检测时间较长。

发明内容

本发明提供了谷胱甘肽的检测方法，能够缩短样品检测时间。

为了解决上述问题，本发明实施例提供了谷胱甘肽的检测方法，包括：

制备至少三种浓度的标准溶液，其中，所述标准溶液为具有谷胱甘肽和内标物的溶液，所述至少三种浓度的标准溶液中内标物的量相同；

利用液质联用仪在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液，获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果；

根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中谷胱甘肽的浓度，拟合谷胱甘肽对应的标准曲线方程；

向待处理样品内加入所述内标物和沉淀蛋白试剂，涡旋混匀，并高速离心，取上清液作为待测样品；

利用液质联用仪在预设的检测条件下检测所述待测样品，获得所述待测样品的第二检测结果；

基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测样品中谷胱甘肽的浓度。

具体地，当标准溶液中的谷胱甘肽包括氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽时，标准溶液制备方式包括如下操作：

(1)标准储备液的配制

标准储备液A：精确称取还原型谷胱甘肽标准品置于容量瓶中，用0.1％甲酸水溶液(含10mg/mL的维生素C)进行溶解，并定容至容量瓶的标线，得到标准储备液A，立即封装，密封，并在-80℃条件下保存，有效期为6个月。

标准储备液B：精确称取氧化型谷胱甘肽标准品置于容量瓶中，用0.1％甲酸水溶液(含10mg/mL的维生素C)溶解，并定容至容量瓶的标线，得到标准储备液B，立即封装，密封，并在-80℃条件下保存，有效期6个月。

标准工作液C：取适量上述标准储备液A、标准储备液B，用0.1％甲酸水溶液进行稀释混合，得到含有系列浓度的还原型谷胱甘肽、系列浓度的氧化型谷胱甘肽的系列标准工作液C，密封，并在-80℃条件下保存，有效期为3个月；

内标储备液D：取还原型谷胱甘肽-¹³C₂¹⁵N标准品置于容量瓶，用0.1％甲酸水溶液进行溶解，并定容至容量瓶的标线得到内标储备液D，密封，并在-80℃条件下保存，有效期为6个月；

内标储备液E：取氧化型谷胱甘肽-¹³C₄¹⁵N₂标准品置于冻存管，用0.1％甲酸水溶液进行溶解，并定容至指定体积，得到内标储备液E，密封，并在-80℃条件下保存，有效期为6个月；

(2)混合内标工作液的配制