[发明专利]一种新型的免疫检查点激活免疫共刺激的重组溶瘤痘苗病毒及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种新型的阻断免疫检查点并激活免疫共刺激信号通路的重组溶瘤痘苗病毒及其构建方法和应用，所述的新型阻断免疫检查点并激活免疫共刺激信号通路的重组溶瘤痘苗病毒，能够在肿瘤细胞内选择性复制并且溶解肿瘤细胞，同时表达和分泌可溶性蛋白sCD155；所述的可溶性蛋白sCD155是CD155蛋白的胞外区，能够特异性结合其受体TIGIT和CD226。本发明的新型重组溶瘤痘苗病毒VV‑sCD155具有溶解肿瘤、活化抗肿瘤免疫等多重的抗肿瘤作用，而且其仅在肿瘤细胞中选择性复制，具备很高的安全性，具有良好的开发抗肿瘤药物的前景。

技术领域

本发明涉及肿瘤生物技术领域，具体涉及一种新型的阻断免疫检查点并激活免疫共刺激信号通路的重组溶瘤痘苗病毒及其构建方法和应用。

背景技术

癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一，每年都有数百万的人死于癌症。许多数患者在诊断时已经处于中晚期从而失去外科手术治疗的机会。传统的放、化疗未取得突破性的进展，即使小分子靶向药物，也面临着短期内复发的巨大挑战。

近十年来，抗肿瘤免疫治疗临床研究不断出现的令人振奋的结果，给肿瘤患者重新带来了希望。早在1090年，德国科学家(诺贝尔奖获得者)Paul Ehrlich就提出了免疫系统具有识别并清除异常肿瘤细胞的能力，并尝试免疫治疗，然而疗效不佳。随着科学认知的深入，人们发现肿瘤在发生发展过程中，不仅通过隐藏自己(缺乏被免疫细胞识别的抗原分子)逃避免疫攻击，还通过多种途径主动抑制抗肿瘤的免疫效应细胞，包括启动免疫检查点等诸多途径使免疫细胞失活，达到逃避免疫识别和免疫清除的目的。经典的免疫检查点PD-1及其配体PD-L1以及最近发现的CD155及其受体TIGIT(T cell ITIM domain)信号通路都参与了免疫负性调控。这些免疫检查点相关的信号通路能够显著抑制效应淋巴细胞的活化并使其进入失能状态。至今已有多个免疫检查点阻断剂药物被批准用于临床肿瘤治疗。

TIGIT[T cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosinebasedinhibitory motif(ITIM)domain)是近年来发现的新的免疫检查点分子，其参与了T细胞及NK细胞的负性调控。TIGIT作为免疫检查点分子对T细胞的调控主要通过以下几种方式实现：(1)T细胞上的TIGIT与肿瘤细胞或者APC细胞膜上的CD155(PVR)结合，通过上调肿瘤或者APC细胞IL-10的表达，同时下调肿瘤细胞IL-12的表达等方式参与免疫抑制；(2)T细胞上的TIGIT分子可以直接与自身细胞上的免疫共刺激分子CD226结合，阻断CD226形成同源二聚体，从而抑制共刺激CD226介导的免疫活化；(3)此外，CD155作为免疫共刺激分子CD226的配体，与TIGIT的亲和性远远大于CD226，因此，TIGIT分子通过竞争性结合CD155，从而阻断CD155/CD226通路介导的免疫共刺激信号，参与免疫抑制调控。T细胞表达TIGIT所介导的负性调控，主要是通过阻断CD226共刺激通路，而后者在T细胞介导的抗肿瘤免疫中似乎不可或缺。因此，在阻断TIGIT的同时，恢复CD226的免疫共刺激通路，是一个巧妙而且有效的抗肿瘤免疫策略。

虽然阻断免疫检查点的抗肿瘤治疗已经被广泛证实为有效的治疗策略，但是也遇到了一些亟需解决的问题。首先，肿瘤患者对阻断免疫检查点的免疫治疗反应性低，普适性(有效率)有待提高。其次，临床研究发现，系统性阻断免疫检查点存在“脱靶”而“误伤”正常组织的情况，由此带来了自身性免疫损伤如心肌炎等副作用。前期的临床试验数据表明，肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的多少和肿瘤局部的免疫活化状态是靶向免疫检查点治疗能否显效的重要预测指标。在CD8⁺T细胞介导的肿瘤清除过程中，I型干扰素(IFNα/β)通路的活化是靶向免疫检查点治疗的重要事件。因此，如何在肿瘤局部有效诱导I型干扰素介导的免疫活化、增强肿瘤微环境免疫细胞的浸润、增加肿瘤对免疫检查点抑制剂治疗的敏感性，是解决免疫检查点治疗普适性(有效率)不高的有效手段之一。