[发明专利]用于甘蓝黑腐病抗性筛选的PCR引物、试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 202010708098.1 | 申请日： | 2020-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN112266970B | 公开（公告）日： | 2022-07-05 |
| 发明（设计）人： | 吕红豪;孔枞枞;陈果;方智远;杨丽梅;庄木;张扬勇;王勇;季家磊 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京百欧知识产权代理事务所(普通合伙) 11930 | 代理人： | 吴泳历 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 甘蓝 黑腐病 抗性 筛选 pcr 引物 试剂盒 及其 应用 | ||
1.用于筛选甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)黑腐病抗性材料的PCR引物，其核苷酸序列为：
上游引物Bobr8631-F：5`-GTCGAGGCTAGAACTAAGTG-3’
下游引物Bobr8631-R：5`-TAAAGACAACATACCCGGAC-3’；
所述PCR引物扩增的甘蓝黑腐病抗性材料特征条带大小为158bp，其核苷酸序列如SeqID No.3所示。
2.用于筛选甘蓝黑腐病抗性材料的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的PCR引物。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于进行PCR和/或电泳所需的试剂。
4.用于筛选甘蓝黑腐病抗性材料的方法，其特征在于，包括采用权利要求1所述的PCR引物和/或权利要求2或3所述的试剂盒进行如下步骤：
(1)采用所述PCR引物对待测甘蓝材料的基因组DNA进行PCR；
(2)凝胶电泳检测所述PCR产物；
(3)从所述电泳检测结果中筛选出与所述甘蓝黑腐病抗性材料特征条带大小一致的材料；
所述甘蓝黑腐病抗性材料特征条带为158bp，其核苷酸序列如Seq ID No.3所示。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR反应体系为：PCR反应总体积为10μL，其中10μmol/L的上下游引物各0.5μL，2×3G Taq Master Mix for PAGE 5μL，模板DNA50ng，其余为ddH2O。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR的反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性15s，58℃退火15s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸5min；4℃保存。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述凝胶电泳检测指采用8％的聚丙烯酰胺凝胶，于165V恒功率电泳分离60分钟，经固定、银染、显色后拍照。
8.权利要求2或3所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，在标有甘蓝黑腐病抗性筛选用途的包装盒内装有权利要求1所述的PCR引物。
9.权利要求2或3所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述标有甘蓝枯萎病抗性筛选用途的包装盒内还装有用于进行PCR和/或电泳所需的试剂。
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