[发明专利]用于甘蓝黑腐病抗性筛选的PCR引物、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了涉及分子育种技术，特别是一种辅助鉴定甘蓝黑腐抗性的专用PCR引物、试剂盒及其应用，用于甘蓝黑腐病抗性筛选的PCR引物为Bobr8631‑F/Bobr8631‑R，其核苷酸序列如Seq ID No.1和Seq ID No.2所示；利用本发明提供的引物或试剂盒辅助鉴定甘蓝黑腐病抗性和/或辅助筛选具有黑腐病抗性的甘蓝，与抗性鉴定结果吻合率达92.86％，将本发明的PCR引物、试剂盒或方法用于育种具有操作简便易行、特异性强、稳定性好、可以实现早期选育等优点，具有重大应用前景。

技术领域

本发明涉及分子育种技术，具体涉及一种辅助鉴定甘蓝黑腐病抗性的PCR引物、试剂盒及其应用。

背景技术

结球甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)简称甘蓝，是重要的十字花科芸薹属蔬菜之一，其适应性好、抗逆性强、易贮耐运、产量高，又具有较高的营养和保健价值，在我国乃至世界各地广泛栽培。目前，我国甘蓝年栽培面积约90万hm²，占世界甘蓝类蔬菜收获面积的1/3以上，在蔬菜周年供应和出口创汇中发挥重要作用。

甘蓝黑腐病由野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestrispv.campestris)引起，是危害甘蓝生产的三大主要病害之一。黑腐病主要症状为叶片呈“V”字型病斑，严重时叶脉变黑，甚至整株萎蔫、死亡。该病自1895年发现于美国后在世界各地主要甘蓝产区逐渐发现并加重，我国自20世纪50年代发现，至80年代已在全国普遍流行。近几年，由于栽培面积的增加及不合理栽培方式的影响(如高密度、连作等)，其危害程度日趋严重，极大地威胁着甘蓝类蔬菜的质量与产量。

在病害防治上，种子消毒，药剂防治，合理轮作与间作等传统方法收效甚微，并不能从根本地上解决黑腐病对甘蓝类作物的为害，因此抗病品种的培育尤为重要。常规的抗病育种方法虽然发挥了重大作用，但主要通过杂交和多代自交，且抗病材料筛选和田间鉴定等过程较复杂，周期相对较长，易受环境条件影响，可靠性较差。因而本领域亟需开发出一种PCR引物及相关试剂盒用于辅助筛选含黑腐病抗性基因的甘蓝材料。

发明内容

根据本领域的上述需求，本发明提供一种用于甘蓝黑腐病抗性筛选的PCR引物，其特异性强，稳定性好，能够快速、有效、灵活地利用任一阶段的甘蓝植株筛选出含黑腐病抗性基因的甘蓝材料，用于育种。

本发明请求保护的技术方案如下：

用于筛选甘蓝(Brassica oleracea var.capitata)黑腐病抗性材料的PCR引物，其核苷酸序列为：

上游引物Bobr8631-F：5`-GTCGAGGCTAGAACTAAGTG-3’

下游引物Bobr8631-R：5`-TAAAGACAACATACCCGGAC-3’；

所述PCR引物扩增的甘蓝黑腐病抗性材料特征条带大小为158bp，其核苷酸序列如Seq ID No.3所示。

用于筛选甘蓝黑腐病抗性材料的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的液体剂或粉剂PCR引物。

所述试剂盒，还包括用于进行PCR和/或电泳所需的试剂。

用于筛选甘蓝黑腐病抗性材料的方法，其特征在于，包括采用所述的PCR引物和/或所述的试剂盒进行如下步骤：

(1)以待测甘蓝样品为材料，提取样品的基因组DNA；

(2)采用所述PCR引物对待测甘蓝材料的基因组DNA进行PCR；

(2)聚丙烯酰胺凝胶电泳检测所述PCR产物；

(3)从所述电泳检测结果中筛选出与所述甘蓝黑腐病抗性材料特征条带大小一致的材料；