[发明专利]检测基因PEAR1 SNP位点的引物、方法和试剂盒在审
申请号: | 202010708483.6 | 申请日: | 2020-07-22 |
公开(公告)号: | CN111893173A | 公开(公告)日: | 2020-11-06 |
发明(设计)人: | 刘赵玲;牛林梅;王淑一 | 申请(专利权)人: | 福州艾迪康医学检验所有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6883 | 分类号: | C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11 |
代理公司: | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人: | 黄素萍 |
地址: | 350008 福建省福*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 基因 pear1 snp 引物 方法 试剂盒 | ||
1.利用高分辨率溶解曲线技术检测PEAR1基因SNP位点rs12566888的引物,其特征在于,所述引物的碱基序列为:
PEAR1-HRM-F:CACAGCTTGTAAGACAGAGATAGG;
PEAR1-HRM-R:AACCCTAGTTCCTTGCTCGG。
2.如权利要求1所述的引物,其特征在于,PEAR1-HRM-F与PEAR1-HRM-R的摩尔比为1:1。
3.如权利要求1所述的引物,其特征在于,所述引物还包括用于验证检测结果的一对扩增引物,其碱基序列为:
PEAR1-CX-F:TGAGGTCTGAGGTCTGAGGT;
PEAR1-CX-R:AACCCTAGTTCCTTGCTCGG。
4.如权利要求3所述的引物,其特征在于,所述引物还包括用于一对测序引物,其碱基序列为:
PEAR1-CX-F:TGAGGTCTGAGGTCTGAGGT;
PEAR1-CX-R:AACCCTAGTTCCTTGCTCGG。
5.一种利用高分辨率溶解曲线技术检测PEAR1基因SNP位点rs12566888的方法,其步骤为:
(1)提取样本中的DNA;
(2)加入(1)中提取的DNA到反应管中,利用引物PEAR1-HRM-F和PEAR1-HRM-R进行扩增,并确定样本溶解曲线;
(3)将样本溶解曲线与标准品溶解曲线进行比对,确定样本DNA的基因型,其特征在于:引物PEAR1-HRM-F和PEAR1-HRM-R的碱基序列为:
PEAR1-CX-F:TGAGGTCTGAGGTCTGAGGT;
PEAR1-CX-R:AACCCTAGTTCCTTGCTCGG。
6.一种利用高分辨率溶解曲线技术检测PEAR1基因SNP位点rs12566888的试剂盒,所述试剂盒包括HRM PCR反应液,所述HRM PCR反应液包括一对检测rs12566888位点的引物,其特征在于,所述引物的碱基序列为:
PEAR1-HRM-F:CACAGCTTGTAAGACAGAGATAGG;
PEAR1-HRM-R:AACCCTAGTTCCTTGCTCGG。
7.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括标准品和阴性对照品,所述标准品为GG基因型、GT基因型及TT基因型DNA,所述阴性对照品为生理盐水或不加任何物质。
8.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括用于验证检测结果的一对扩增引物,其碱基序列为:
PEAR1-CX-F:TGAGGTCTGAGGTCTGAGGT;
PEAR1-CX-R:AACCCTAGTTCCTTGCTCGG。
9.如权利要求8所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括测序体系试剂,所述测序体系试剂包括一对测序引物,其碱基序列为:
PEAR1-CX-F:TGAGGTCTGAGGTCTGAGGT;
PEAR1-CX-R:AACCCTAGTTCCTTGCTCGG。
10.如权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述测序体系试剂还包括测序纯化液:虾碱性磷酸酶:0.6U、外切酶I:1.2U;125mmol EDTA;无水乙醇;70%乙醇;HIDI;BigdyeTerminator V3.1。
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