[发明专利]一种自由产卵桡足类纯种分离和培养方法及其装置

权利要求书

1.一种桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：将野外采集的桡足类样本放在暂养缸，从中选择趋光性强和活性好的个体转移至培养皿中，根据桡足类外形特征进行定向分选，获得桡足类个体；

步骤2：将上步获得的桡足类个体放入细胞培养板中，每孔只放一个个体，孔内事先装入球等鞭金藻和过滤海水混合成的藻液，观察桡足类个体是否产卵，筛选出产卵的个体继续培养，其余个体返回暂养缸；

步骤3：将装有产卵个体的细胞培养板放置平板光源上方，形成底部平面光源照射条件，控制光照强度和光照周期，在显微镜下观察细胞培养板中桡足类个体的增殖情况及其存活数量；

步骤4：培养一段时间后，将细胞培养板中的桡足类转移到烧杯内进行扩大培养，所述烧杯事先装入过滤海水，每天用新鲜的所述藻液更换所述烧杯内部分原有的藻液，更换前先将桡足类灯诱到一侧，在另一侧用虹吸方式转移出部分原有的藻液；所述烧杯放置平板光源上方，形成底部平面光源照射条件，控制光照强度和光照周期，观察烧杯中所述桡足类个体的增殖情况及其存活数量；

步骤5：培养至成体并孵化出下一代幼体时，将烧杯中的桡足类转移到水族箱内进行培养，转移方法为将原烧杯中的藻液倒入事先备好藻液的水族箱中，微充气培养，配置一个水族灯，控制水表面光照强度和培养水体中藻类密度，并进行成体分类鉴定或生长观测。

2.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：步骤1中根据桡足类外形特征，选择矮胖型，或者纺锤型桡足类，继续从中分选生殖节凸起的桡足类雌性个体，转移至细胞培养板中。

3.根据权利要求2所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：所述细胞培养板具有多个孔，在所述细胞培养板中，将单个桡足类依次转移至装有新鲜过滤海水的邻近孔中，缓慢浸洗3-5次，以完成单个桡足类的清洗，保证获得单个完好的个体。

4.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：所述藻液是将指数生长期的球等鞭金藻，和经过0.01μm孔径滤材过滤的海水混合后，使其藻液浓度为0.1-1×10⁵cell/mL，海水盐度范围为25-35；

任选的，步骤2中室温控制在25±3℃，每隔20-30min镜检一次，观察是否产卵，筛选出产卵的个体继续培养，其余个体返回暂养缸。

5.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：步骤3中底部平面光源照射控制光照强度为500-800Lux；

任选的，步骤3中可在显微镜下观察细胞培养板中所述桡足类增殖情况及其存活数量，也可在观察细胞培养板中所述桡足类个体时辅助灯诱条件，灯诱时环境光照强度为100±10Lux，选用可切换光强的照明装置进行灯诱，照明装置的光照强度为3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好，便于观察增殖情况及其存活数量。

6.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：步骤4中底部平面光源照射控制光照强度为500-800Lux；

任选的，步骤4中控制光照周期为12h黑暗和12h光照循环；

任选的，步骤4中虹吸时采用300目的筛绢，对虹吸出的藻液进行前端过滤，以截留下烧杯中的桡足类；

任选的，步骤4中观察烧杯中所述桡足类个体时辅助灯诱条件，灯诱时环境光照强度为100±10Lux，选用可切换光强的照明装置进行灯诱，照明装置的光照强度为3000-3500Lux时，桡足类趋光性较好，便于观察增殖情况及其存活数量。

7.根据权利要求1所述桡足类纯种分离和培养方法，其特征在于：步骤5中水族灯使水表面光照强度为5000-6000Lux，培养水体中光照强度控制在3000-6000Lux，培养水体中藻类密度控制在0.1-1×10⁵cells/mL。