[发明专利]一种自由产卵桡足类纯种分离和培养方法及其装置

说明书

本发明涉及一种自由产卵桡足类纯种分离和培养方法及其装置，所述方法包括：步骤1：将野外采集的桡足类样本放在暂养缸，定向分选获得桡足类个体；步骤2：将上步获得的桡足类个体放入细胞培养板中，筛选出产卵的个体继续培养；步骤3：将装有产卵个体的细胞培养板放置平板光源上方，形成底部平面光源照射条件，在显微镜下观察细胞培养板中所述桡足类个体的增殖情况及其存活数量；步骤4：扩大培养；步骤5：培养至成体并孵化出下一代幼体时，转移到水族箱内进行培养，并进行成体分类鉴定或生长观测。上述方法可以较快分离纯化获得自由产卵的桡足类，进行保种和规模化培养，个体存活率高，从而为海水鱼虾贝幼体发育提供丰富的营养供应。

技术领域

本发明涉及水产养殖技术，尤其是一种自由产卵桡足类纯种分离和培养方法及其装置。

背景技术

传统的生物活饵料轮虫和丰年虫无节幼虫，易保种或购买商品休眠卵，可高密度培养，在水产育苗过程中被广泛应用。然而这两类饵料缺乏不饱和脂肪酸，生产过程中往往需要强化或配合添加剂使用。很多海水鱼幼鱼发育过程中，对不饱和脂肪酸需求较高，强化后的轮虫仍难以满足其幼体发育对不饱和脂肪酸的营养需求。此外，小型海水神仙鱼仔鱼口裂约30-100μm，即使是最小的SS轮虫也难以满足较小口裂仔鱼开口。因此，迫切需要开发粒径小且富含不饱和脂肪酸的生物活饵料。

桡足类(copepod)隶属于节肢动物门(Arthropoda)，甲壳纲(Crustacea)[颚足纲(Maxillopoda)]，桡足亚纲(Copepoda)，是一类低等的小型甲壳动物。小型桡足类如强额拟哲水蚤等，个体粒级小，营养丰富，富含多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated fatty acid，PUFA)、二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid，DHA)和二十碳五烯酸(EicosapentaenoicAcid，EPA)(占总脂肪酸的60％)，富含抗氧化剂，虾青素，维生素C、D、E等，营养价值高于轮虫和卤虫，其卵和早期幼体更适合做鱼类的开口饵料。而且，桡足类特殊的游泳方式还有助于诱发幼鱼强烈的摄食反应。目前生产育苗的桡足类基本源自野生采集，种类混杂且难以保证质量，极易携带病原生物。为了更好的发挥桡足类作为生物活饵料的作用，分离纯种进行规模化培养是必经之路。本专利发明了针对小型自由产卵哲水蚤桡足类的分离纯化和培养方法，可获得纯种并在实验生态条件下保种培养，满足小型海水神仙鱼仔鱼开口及后期发育的需要。

桡足类按产卵发育方式，分为挂卵囊和自由产卵两类。挂卵囊种类较容易分离获得纯种。自由产卵的种类，常规的分离方法一般将桡足类经灯诱转移至培养皿中，再将其转移至适合放入解剖镜下观察的容器中，进行单个个体分离，分离的个体在显微镜下用巴斯德吸管转移至烧杯中，再放入培养箱中培养。上述分离过程中依靠肉眼显微镜下操作，吸管极易带入非目标生物，很难达到纯种分类，甚至由于引入优势种或肉食性种类，导致目标种后期培养困难。另外，桡足类无节幼虫因趋光性强，常常趋光于水表面，而水表面常常会积聚油膜，影响其存活。尤其是一些小型的哲水蚤桡足类，如强额拟哲水蚤、厦门矮隆水蚤、拟矮隆水蚤等，体长在1mm以下，所产的卵大小在55-75μm，个体小，常规的分离方法不便于观察，不能及时掌握所分离桡足类增殖的情况，以及分离容器中无节幼虫存活的情况，严重影响分离的效率。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有自由产卵桡足类个体纯种分离困难以及分离出的桡足类个体存活率低等问题，提供一种高效的桡足类纯种分离和培养方法，该方法利用细胞培养板、烧杯，采用底部光源等进行分离培养，满足了桡足类不同生长发育阶段的要求，既保证纯种的获得，又提高了分离纯化的效率。

本发明还提供一种桡足类纯种分离和培养的装置，包括细胞培养板分离培养装置、烧杯分离培养装置和水族箱，该装置可以从野外采集的桡足类中分离出纯种，并完成所筛选纯种的扩大培养，培养过程中桡足类的存活率较高。

具体方案如下：

一种桡足类纯种分离和培养方法，包括以下步骤：