[发明专利]一种抗肥胖活性化合物的筛选方法

权利要求书

1.一种抗肥胖活性化合物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)进行3T3-L1前脂肪细胞膜脂质筏体系的理论构建，并判断该体系是否达到平衡；

(2)实验测定不同结构多酚化合物抑制前脂肪细胞分化的IC₅₀；

(3)进行多酚化合物分子结构参数的理论计算及不同结构多酚与脂质筏的分子动力学模拟；

(4)采用多元统计法建立不同结构多酚化合物抑制前脂肪细胞分化的IC₅₀与不同结构多酚对脂质筏影响的理论关系式，所述理论关系式为Y＝238.32-16.93X₁-24.00X₅+84.44X₁₁，R²＝0.94，其中，Y为多酚化合物的IC₅₀，X₁为多酚分子与脂质筏形成的氢键个数，X₅为多酚分子的疏水性，X₁₁为多酚分子与胆固醇的距离；

(5)对不同活性多酚化合物进行分类：将步骤(4)获得的自变量X₁、X₅和X₁₁输入到Statisticalanalysis system中，进行分类，以半偏R方为0.06将不同化合物分为三组，从上到下依次规定为高活性组(IC₅₀50μM)，中活性组(IC₅₀:50-100μM)，低活性组(IC₅₀150μM)；

(6)对不同活性多酚化合物分类的验证，选择步骤(5)高活性组、中活性组、低活性物各组的2个多酚化合物验证不同结构多酚化合物活性大小与其对脂质筏破坏效应大小存在相关性；

(7)对本方法的验证，通过分子动力学模拟待测化合物与脂质筏体系在分子层面的相互作用，并分析其数据，将分子动力学模拟获得的数据代入到步骤(4)所获得的理论关系式中得到IC₅₀预测值，并通过步骤(2)获得待测化合物IC₅₀实验值，将IC₅₀实验值与预测值进行相关性分析及偏差分析，其中二者的相关系数R＝0.97,标准偏差介于0-6之间。

2.根据权利要求1所述的一种抗肥胖活性化合物的筛选方法，其特征在于，步骤(1)所述3T3-L1前脂肪细胞膜脂质筏体系的理论构建基于3T3-L1前脂肪细胞膜脂质筏主要成分胆固醇，鞘磷脂，棕榈酰油酰磷脂酰胆碱摩尔比为2:1:1构建。

3.根据权利要求1所述的一种抗肥胖活性化合物的筛选方法，其特征在于，步骤(1)所述3T3-L1前脂肪细胞膜脂质筏体系的平衡通过分子动力学软件Gromacs 5.1.4对脂质筏体系进行非限制性分子动力学模拟100ns并分析平衡参数。

4.根据权利要求3所述的一种抗肥胖活性化合物的筛选方法，其特征在于，所述平衡参数为脂质筏体系均方涨落偏差，脂分子头基面积。

5.根据权利要求1所述的一种抗肥胖活性化合物的筛选方法，其特征在于，步骤(2)所述实验测定不同结构多酚抑制前脂肪细胞分化的IC₅₀通过以下方式进行：3T3-L1前脂肪细胞置于37℃，含5％的CO₂的培养箱中培养，待细胞产生接触抑制2天后，采用胰岛素，地塞米松和异丁基甲基黄嘌呤诱导细胞分化，在细胞分化的不同阶段，分别加入不同浓度的不同结构多酚，于第8天检测细胞内脂肪的含量，计算其IC₅₀值。

6.根据权利要求1所述的一种抗肥胖活性化合物的筛选方法，其特征在于，步骤(3)所述多酚分子结构参数的理论计算首先采用CHEMDRAW 12.0画出不同结构多酚的二维结构，随后运用MM2 job进行三维结构空间优化，之后获得多酚分子结构参数：多酚的疏水性，拓扑极性表面积，体积及氢键受体个数。