[发明专利]一种诊断泡型棘球蚴病的ELISA方法

说明书

本发明提供了一种诊断泡型棘球蚴病的ELISA方法，本方法是以串联蛋EmAgB3‑GGGS‑Em18为抗原设计的，对泡型棘球蚴病具有良好的敏感性和特异性，检测准确率高，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物诊断技术，具体为一种诊断泡型棘球蚴病的ELISA方法。

背景技术

泡型棘球蚴病（Alveolar echinococcosis, AE）是由多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis, Em）的续绦期幼虫感染引起的一种人畜共患寄生性蠕虫疾病。该病在中国、日本、俄罗斯、中亚和北美部分地区流行严重。根治性肝切除手术是目前唯一比较可靠的治疗方法。因此，AE早期免疫诊断是降低本病死亡率的关键要求。当前，基于纯化的天然抗原Em2的酶联免疫吸附试验（Em2-ELISA）的诊断方法已被世界卫生组织推荐用于AE的血清诊断。但其抗原的敏感及特异性仍需进一步提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种诊断泡型棘球蚴病的ELISA方法。

本发明提供的诊断泡型棘球蚴病的ELISA方法，具体包括如下步骤：

（1）抗原包被：用包被液将抗原rEmAgB3-GGGS-Em18稀释成1 μg/mL，加入酶标板，置于4℃过夜；

（2）洗涤：弃去包被液，PBST洗涤3次后，拍干；

（3）封闭： 加入1% BSA ，37℃恒温箱中孵育2 h；

（4）洗涤：弃去封闭液，PBST洗涤3次后，拍干；

（5）一抗孵育：加入稀释后的待测血清，37℃孵育2 h；

（6）洗涤：弃去一抗，PBST洗涤3次后，拍干；

（7）二抗孵育：加入山羊抗人IgG酶标二抗（1:10000稀释），37℃孵育2 h；

（8）洗涤：弃去二抗，PBST洗涤3次后，拍干；

（9）显色：加入TMB底物，37℃避光孵育10 min；

（10）终止：加入2 mol/L的H₂SO₄终止反应。

（11）测定：将酶标板置于酶标仪中在450nm波长下进行测定吸光光度值（OD_450nm）；

（12）判定：OD_450nm≥0.405判定为阳性； OD_450nm≤0.353判为阴性；0.353＜OD_450nm＜0.405判为可疑。

作为优选，所述步骤（5）中待测血清的稀释比例为1:100。

本发明提供的方法是以串联蛋白Escherichia coli pET28a-BL21(DE3)/01/EmAgB3-GGGS-Em18（以下简称为EmAgB3-GGGS-Em18）为抗原设计的，该蛋白现保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO: M 2019622，保藏日期2019年8月27日。