[发明专利]一种T细胞模型及其在体外人源PD-1抗体药效评价中的应用

说明书

本发明涉及生物医药类领域，具体涉及一种T细胞模型及其在体外人源PD‑1抗体药效评价中的应用；本发明通过对huGEMMPD‑1小鼠接种MC‑38肿瘤，促进体内MC‑38肿瘤抗原表位特异性免疫应答和记忆T细胞的产生，并通过体外扩增MC‑38肿瘤表位特异性T细胞，进而建立MC‑38表位特异性T细胞库。再通过共培养携带肿瘤特异性抗原并且同时过表达人的PD‑L1分子的MC‑38细胞（MC‑38‑hPD‑L1）与表位特异性T细胞，在体外模拟肿瘤微环境中的肿瘤抗原‑TCR特异性T细胞激活和基于肿瘤微环境中T细胞表面PD‑1分子的抑制实验，用于评价人源的hPD‑1/PD‑L1抗体的药效提供一个很好的实验平台。

技术领域

本发明涉及生物医药类领域，具体涉及一种T细胞模型及其在体外人源PD-1抗体药效评价中的应用。

技术背景

随着近十几年人们对肿瘤免疫的深入研究，以及对肿瘤微环境中肿瘤细胞和免疫细胞相互作用的机制探讨，越来越多的基础研究和临床试验显示免疫检查点抑制剂(Immune Checkpoint Inhibitor，ICI)在抗肿瘤治疗中的临床效果显著。目前报道最有效的免疫检查点靶点为PD-1(Programmed Death-1)和CTLA-4(cytotoxic T lymphocyteantigen 4)，针对PD-1的抗体已被批准用于黑色素瘤、肺癌、肾癌、头颈癌等多种癌症的一线治疗1。

PD-1是一个分子量为50-55kD的一型跨膜糖蛋白，属于CD28超家族，它是表达在T细胞表面的重要的免疫抑制分子，参与T细胞激活的负反馈调节并促进T细胞耗竭(T cellexhaustion)，在自身免疫病易感的小鼠品系如MRL小鼠中，PD-1敲除会诱发致命性心肌炎、系统性红斑狼疮等自身免疫疾病2。PD-1的配体包括PD-L1(CD274,B7-H1)和PD-L2(CD273,B7-DC)，广谱的表达在多种抗原提呈细胞，如树突状细胞和巨噬细胞；肿瘤细胞也高表达PD-L1，并且被多种细胞因子如IFN-r调控。PD-L1/PD-L2配体结合T细胞表面的PD-1受体后，促使PD-1胞内区域酪氨酸磷酸化，招募酪氨酸磷酸酶SHP2，从而抑制TCR下游的磷酸化和信号传递，负向调节T细胞的活化和细胞因子的产生3。针对PD-1和PD-L1、PD-L2的封闭型抗体的研究表明，抑制PD-1/PD-L1通路能有效的改善肿瘤微环境中浸润的杀伤性CD8+T细胞(Cytotoxic T cell,CTLs)的功能，促进炎性细胞因子如IFN-r、TNF-a、IL-2的分泌，进而促进耗竭的T细胞重新进入细胞周期，增强肿瘤杀伤作用。

目前用于临床前评价PD-1/PD-L1封闭型抗体的体外药效实验主要包括混合淋巴细胞反应(Mix Lymphocyte Reaction,MLR)，SEB(Staphylococcal enterotoxin B)超级抗原诱导的T细胞激活，巨细胞病毒激活实验(cytomegalovirus stimulation assays)2等。其中，应用最广泛的是混合淋巴细胞反应，它是由同种异体免疫排斥反应介导T细胞激活，由于MHC异体抗原(alloantigen)的多样性，以及不同供体T细胞识别MHC异体抗原能力和激活强度的差异，致使不同批次的混合淋巴细胞反应实验有很的差异(variation)。其次，混合淋巴细胞反应主要通过检测供体DC细胞和受试T细胞共培养3-5天后，T细胞分泌的细胞因子或者T细胞的扩增来间接反应T细胞的肿瘤杀伤能力，以及PD-1/PD-L1抑制型抗体的封闭效果，无法直接反应肿瘤细胞的杀伤情况。另外，肿瘤微环境中的T细胞激活是由肿瘤细胞MHC分子提呈特异的肿瘤抗原与能够识别该表位的TCR相结合而激发的，与同种异体抗原介导的T细胞激活的TCR-alloantigen亲和力(affinity and avidity)不同，从而PD-1的表达强度也不相同，所以混合淋巴细胞反应不能很好的模拟肿瘤微环境中PD-1/PD-L1的相互作用和抗体的抑制能力。

发明内容