[发明专利]一种改良柑橘的sgRNA及其应用和使用方法在审
| 申请号： | 202010711527.0 | 申请日： | 2020-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN111748555A | 公开（公告）日： | 2020-10-09 |
| 发明（设计）人： | 邹修平;文庆利;龙俊宏;刘语诺;龙琴;何永睿;彭爱红;陈善春 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/78 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 王灿 |
| 地址： | 400700*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 改良 柑橘 sgrna 及其 应用 使用方法 | ||
1.一种改良柑橘的sgRNA，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQID No.9或SEQ ID No.10。
2.根据权利要求1所述的一种改良柑橘的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA序列在改良柑橘时作用于柑橘CsPP2B15基因。
3.权利要求1所述的一种改良柑橘的sgRNA在改良柑橘黄龙病抗性中的应用。
4.权利要求1所述的一种改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)利用sgRNA序列构建CRISPR/Cas9编辑用表达载体；
(2)将步骤(1)构建的表达载体导入到柑橘中，筛选出转基因植株；
(3)从步骤(2)获得的转基因植株中筛选出CsPP2B15突变体植株；
(4)从步骤(3)获得的CsPP2B15突变体植株中筛选出柑橘黄龙病抗性植株。
5.根据权利要求4所述的一种改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)中构建载体时所用的载体为pCas9-CsPP2B15sgRNA。
6.根据权利要求4所述的一种改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)中构建载体时所用的酶为BamHI/SalI酶。
7.根据权利要求4所述的一种改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述导入的方法为根癌农杆菌介导法和电击转化法。
8.根据权利要求4所述的一种改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述的转基因柑橘植株筛选方法为抗性筛选、GUS组织化学染色和PCR验证。
9.根据权利要求4所述的一种改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步骤(3)中筛选突变体植株的方法为Sanger测序法和重测序技术。
10.根据权利要求4所述的一种改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步骤(4)中黄龙病抗性植株筛选方法为嫁接传毒、温室症状和切片观察、定量PCR检测。
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