[发明专利]鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156及其应用

权利要求书

1.一种鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156，其特征在于：所述鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156具有广谱性、能够裂解沙门氏菌耐药菌株，其命名为鼠伤寒沙门氏菌噬菌体（Salmonella typhimurium bacteriophage）T156，其保藏编号为：CCTCC NO：M 2020288。

2.一种权利要求1所述鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156在制备预防沙门氏菌的杀菌剂中的应用，其特征在于：所述沙门氏菌为鼠伤寒沙门氏菌 ATCC 13311。

3.一种权利要求1所述鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156微囊化的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）将新鲜宿主菌ATCC 13311和鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156混合，恒温培养，得到悬浊裂解液，离心收集过滤，得到鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156悬液；

2）将Tris-HCI溶液加入灭菌的海藻酸钠中，然后加入鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156悬液，搅拌；得到噬菌体T156-海藻酸钠的混合液；

3）向噬菌体T156-海藻酸钠的混合液中逐滴滴入20 mL、质量分数为2.5% 的CaCI₂ 溶液中形成海藻酸钙微囊，边滴加边摇晃，静置硬化；

4）过滤收集微囊，用去离子水洗涤，再投入壳聚糖溶液中成膜反应，再次过滤微囊并用去离子水洗涤，除去未反应的壳聚糖；得到微囊化鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156。

4.根据权利要求3所述鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156微囊化的方法，其特征在于：所述方法的具体方法如下：

1）取1 mL新鲜宿主菌ATCC 13311，100 µL效价为10⁹ PFU/mL噬菌体T156混合，置于37℃恒温培养箱孵育15-20 min，将此细菌-噬菌体混合液转移至25 mL含10 mM MgSO₄的LB液体培养基中，37℃，180 r/min振荡培养18 h，得到悬浊裂解液，于4℃、8000 r/min离心10min，收集上清液；上清液再经0.22 µm一次性过滤装置过滤除菌，得到噬菌体T156悬液；

2）称取0.22 g海藻酸钠置于生物安全柜中，紫外杀毒30 min；再将1 moL/L Tris-HCI稀释为50 mmoL/L，并用0.22 µm一次性过滤装置过滤除菌，吸取10 mL倒入紫外照射后的海藻酸钠，加入搅拌子在磁力搅拌器上，30℃、300 r/min搅拌混匀，然后加入噬菌体T156悬液，30℃、250 r/min继续搅拌；

3）再将上述噬菌体T156-海藻酸钠的混合液，用1 mL无菌注射器逐滴滴入20 mL、质量分数为2.5% CaCI₂ 溶液中形成海藻酸钙凝胶，边滴加边摇晃，且控制滴加的力度和速度，尽量使微囊形态一致，20±2℃静置硬化30 min；

4）过滤收集微囊，用去离子水洗涤，再投入质量分数为0.4% 壳聚糖溶液中成膜反应30min；再次过滤微囊并用去离子水洗涤，除去未反应的壳聚糖；得到微囊化鼠伤寒沙门氏菌噬菌体T156。