[发明专利]一种多孔阳极氧化铝-Cas/dCas家族蛋白复合传感膜片及其制备方法及应用方法

权利要求书

1.一种多孔阳极氧化铝-Cas/dCas家族蛋白复合传感膜片，其特征在于，多孔阳极氧化铝膜片的表面或孔道内壁连接有Cas/dCas家族蛋白；

所述多孔阳极氧化铝-Cas/dCas家族蛋白复合传感膜片的制备方法，包括：

（1）对多孔阳极氧化铝膜片进行清洗预处理，得预处理后的多孔阳极氧化铝膜片；

（2）对所述预处理后的多孔阳极氧化铝膜片的阻挡面层依次进行羟基化表面修饰处理、氨基化表面修饰处理和戊二醛组装表面修饰处理，得到改性多孔阳极氧化铝膜片；

所述对所述预处理后的多孔阳极氧化铝膜片的阻挡面层或孔道内表面依次进行羟基化表面修饰处理、氨基化表面修饰处理和戊二醛组装表面修饰处理，得到改性多孔阳极氧化铝膜片的步骤，包括：

（1）使用电晕枪外焰对所述预处理后的多孔阳极氧化铝膜片的阻挡层或孔道内表面进行来回接触，以使所述预处理后的多孔阳极氧化铝膜片的阻挡层表面或孔道内表面羟基化，得表面羟基化的多孔阳极氧化铝膜片；

（2）对所述表面羟基化的多孔阳极氧化铝膜片进行氨基化表面修饰处理，得表面氨基化的多孔阳极氧化铝膜片；

（3）对所述表面氨基化的多孔阳极氧化铝膜片进行戊二醛组装表面修饰处理，得所述改性多孔阳极氧化铝膜片。

2.如权利要求1所述的多孔阳极氧化铝-Cas/dCas家族蛋白复合传感膜片，其特征在于，所述对所述表面羟基化的多孔阳极氧化铝膜片的阻挡层进行氨基化表面修饰处理，得表面氨基化的多孔阳极氧化铝膜片的步骤，具体包括：

（1）将所述表面羟基化的多孔阳极氧化铝膜片的阻挡层浸入浓度为1.5%~2%的APTES溶液中，静置过夜；

（2）取出该膜片后用乙醇进行多次冲洗，吹干；

（3）于120℃下加热处理该膜片至少1小时，得表面氨基化的多孔阳极氧化铝膜片。

3.如权利要求1所述的多孔阳极氧化铝-Cas/dCas家族蛋白复合传感膜片，其特征在于，所述对所述表面氨基化的多孔阳极氧化铝膜片的阻挡层进行戊二醛组装表面修饰处理，得所述改性多孔阳极氧化铝膜片的步骤，具体包括：

（1）将所述表面氨基化的多孔阳极氧化铝膜片的阻挡层浸入浓度为2.5%~10%的戊二醛溶液中，于4℃下反应至少4小时；

（2）取出该膜片后，用水冲洗，吹干，完成戊二醛组装表面修饰处理，得所述改性多孔阳极氧化铝膜片。

4.如权利要求1所述的多孔阳极氧化铝-Cas/dCas家族蛋白复合传感膜片的制备方法，其特征在于，所述多孔阳极氧化铝膜片由如下方法制备得到：

（1）将经预处理后的铝箔置于500℃下真空煅烧至少5小时，取出并放入混合酸溶液中进行电化学抛光处理，得抛光处理后的铝箔；

（2）将所述抛光处理后的铝箔在室温下进行两步阳极氧化处理，得到所述多孔阳极氧化铝膜片，其中，两步阳极氧化处理的条件为：氧化电压为30~50V，电解液采用浓度为0.3moL/L的草酸水溶液。

5.如权利要求1所述的多孔阳极氧化铝-Cas/dCas家族蛋白复合传感膜片，其特征在于，所述多孔阳极氧化铝膜片的膜厚度为0.05~0.3mm，膜直径为1~10mm。

6.如权利要求1所述的多孔阳极氧化铝-Cas/dCas家族蛋白复合传感膜片，可用于检测核酸序列。

7.如权利要求1所述的多孔阳极氧化铝-Cas/dCas家族蛋白复合传感膜片在检测核酸序列中的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将表面组装有Cas家族蛋白或dCas家族蛋白的改性多孔阳极氧化铝膜片放入检测容器中，并加入电极缓冲液覆盖所述改性多孔阳极氧化铝膜片的两侧；

（2）向所述检测容器加入根据目的基因设计得到的单链引导核糖核酸RNA，使所述改性多孔阳极氧化铝膜片上的Cas蛋白或dCas家族蛋白与所述单链引导RNA进行结合；

（3）向所述检测容器加入待检测样品后进行膜片电位检测，并根据膜片电位检测结果判定所述待检测样品中是否含有目的基因。