[发明专利]一种神经根受压损伤大鼠动物模型的构建方法

说明书

本发明公开了一种神经根受压损伤大鼠动物模型的构建方法，包括如下步骤：(1)制备一直角三角形的橡胶块；(2)通过手术以完全暴露大鼠的L5的神经根；(3)将上述橡胶块插入椎管并压迫L5的上述神经根；(4)直至无法再将上述橡胶块插入后，将切口逐层缝合以固定上述橡胶块；(5)正常饲养大鼠，定期观察大鼠的背根神经节的组织学变化情况，背根神经节的细胞凋亡的情况，检测caspase‑3的活性情况，以及观察细胞因子的蛋白表达情况。本发明所构建的神经根受压损伤大鼠动物模型的组织学、细胞凋亡情况、caspase‑3的活性情况以及多种细胞因子的表达情况均与临床脊柱退行性疾病的病理特征相似。

技术领域

本发明属于医学动物模型构建技术领域，具体涉及一种神经根受压损伤大鼠动物模型的构建方法。

背景技术

包括椎间盘突出、椎旁韧带骨化和关节突肥大在内的脊柱退行性疾病能够导致神经根受压以及后续的神经传导异常。对其广泛研究已经持续了多年，但其病理机理仍然未明。最近，有报道称坐骨神经损伤和髓核突出诱导背根神经节(DRG)的一些种类的细胞的凋亡。先前的研究已经证明神经病理性疼痛依赖于神经损伤发生后的DRG的细胞死亡。此外，先前的研究还展示了神经根受压损伤诱导DRG神经元的凋亡。尽管先前多篇文献已经对DRG细胞凋亡的机制进行了研究，但神经根受压损伤模型的机理仍然未明。为了更深入的认识由像包括椎间盘突出的退行性脊柱疾病诱导的神经根损伤的发病机理，在动物模型中进行DRG的细胞凋亡的机理的研究就显得十分必要了。但现有技术中，还未出现能满足上述研究要求的动物模型。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种神经根受压损伤大鼠动物模型的构建方法。

本发明的技术方案如下：

一种神经根受压损伤大鼠动物模型的构建方法，包括如下步骤：

(1)制备一直角三角形的橡胶块；

(2)通过手术以完全暴露大鼠的L5的神经根；

(3)将上述橡胶块插入椎管并压迫L5的上述神经根；

(4)直至无法再将上述橡胶块插入后，将切口逐层缝合以固定上述橡胶块；

(5)正常饲养大鼠，定期采用HE染色观察大鼠的背根神经节的组织学变化情况，用TUNEL染色观察背根神经节的细胞凋亡的情况，用分光光度法检测caspase-3的活性情况，以及用western blot观察细胞因子的蛋白表达情况。

在本发明的一个优选实施方案中，所述大鼠为Sprague-Dawley大鼠。

进一步优选的，所述大鼠为2月龄。

在本发明的一个优选实施方案中，所述橡胶块的二直角边分别长3.5-4.5μm和1.5-2.5μm，厚度为0.8-1.2μm。

进一步优选的，所述橡胶块的二直角边分别长4μm和2μm，厚度为1μm。

在本发明的一个优选实施方案中，所述细胞因子包括PARP、Bax、Bcl-2、Fas和TNF-α。

在本发明的一个优选实施方案中，通过手术将大鼠的L5的左椎板暴露出来，然后剥离L5的部分关节突和左椎板以完全暴露其神经根。

在本发明的一个优选实施方案中，所述HE染色包括：将大鼠的左侧L5的背根神经节用4％多聚甲醛固定后，于梯度浓度蔗糖中进行脱水，包埋与OCT胶中进行组织切片，切片的厚度为6μm，然后进行HE染色。

本发明的另一技术方案如下：

上述构建方法得到的神经根受压损伤大鼠动物模型。

本发明的再一技术方案如下：