[发明专利]一种液相色谱串联质谱法检测意蜂蜜和中蜂蜜中王浆主蛋白5的方法

说明书

本发明提供一种液相色谱串联质谱法检测中蜂蜜和意蜂蜜的王浆主蛋白5(MRJP5)的方法，包括：筛选分别属于中蜂MRJP5和意蜂MRJP5的特征肽段，建立液相色谱串联质谱检测方法，蜂蜜样品前处理，液相色谱分离以及串联质谱检测，数据分析等步骤；所述特征肽段包括意蜂MRJP5特征肽段：YLDYDFGSDER和中蜂MRJP5特征肽段：NLANSMNVIHEWK。本发明所提出的蜂蜜中MRJP5的检测方法，具有较高的准确度、精确度和灵敏度，并且稳定性强，适用于鉴别意蜂蜜和中蜂蜜，尤其适用于中蜂蜜混入意蜂蜜的掺假鉴别。该方法对保护蜂蜜消费者的权益和维护蜂产品行业的健康发展具有重要现实意义。

技术领域

本发明涉及食品检测领域，具体为一种液相色谱串联质谱法检测蜂蜜中王浆主蛋白5的方法，该方法适用于鉴别中蜂蜜和意蜂蜜。

背景技术

蜂蜜是由蜜蜂采集蜜源植物的花蜜，与自身分泌物相混合、经充分酿造贮存在蜂巢中的一种天然甜味物质。蜂蜜中含有丰富的氨基酸、酚酸、黄酮、微量元素等对人有益的物质，这使其具有润肠、美容和保健等功效，深受人们喜爱。根据蜜源植物的不同，蜂蜜可以分为洋槐蜜、椴树蜜、枣花蜜、荆条蜜、荔枝蜜、龙眼蜜等单花蜜品种。根据蜜蜂种类的不同，可以分为西方蜜蜂、东方蜜蜂、大蜜蜂、小蜜蜂、黑小蜜蜂、黑大蜜蜂、无刺蜂等蜜蜂酿制的蜂蜜。当前，已经人工驯化的蜜蜂，并且实现大规模生产蜜蜂的蜜蜂品种主要是以意大利蜜蜂为代表的西方蜜蜂和以中华蜜蜂为代表的东方蜜蜂，其它蜜蜂品种尚未人工驯化，难以开展规模化养殖。

目前，中蜂蜜由于口感佳，深受人们喜爱，但是中蜂蜜产量较低，仅仅是我国商品蜂蜜的有效补充，也因此其售价往往是意蜂蜜的5-10倍。不良企业为了追去高额利润，往往制售掺假中蜂蜜，其掺假的形式主要是在中蜂蜜中混入廉价的意蜂蜜。当前，尚未有任何有关中蜂蜜真实性的标准或掺假鉴别方法，如何评价中蜂蜜的真实性，鉴别中蜂蜜掺假，已经成为蜂产品行业广大从业者共识。

蜜蜂在酿制蜂蜜的过程中会混入少量的酶类、蛋白质等物质，由于蜜蜂种类的不同，酿制的蜂蜜中含有的蛋白质也会有所不同。王浆主蛋白(MRJPs)是蜂蜜中蛋白质的主要组成成分，中蜂和意蜂酿制的蜂蜜虽然均含有MRJPs，但是两者的氨基酸序列存在差异。通过检测中蜂蜜和意蜂蜜中的同源性蛋白质可以有效的鉴别蜜蜂的品种，从而对酿制的蜜蜂进行品种溯源，进而用来中蜂蜜真实性的评价和惨假鉴别方法的开发。本发明针对蜂蜜丰度较高的MRJP5，基于液相串联质谱开发了中蜂和意蜂MRJP5的检测方法。建立的方法尤其适用于中蜂蜜中意蜂蜜掺假的鉴别，这对保护中蜂蜜产业的发展具有重大的现实意义。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种液相色谱串联质谱法检测蜂蜜中王浆主蛋白5的方法。

该方法可用于生产和商业中对中蜂蜜和意蜂蜜进行鉴定。

第一方面，本发明筛选出可用于液相色谱串联质谱鉴定中蜂蜜和意蜂蜜的王浆主蛋白5（MRJP5）的特征肽段组：

意蜂蜜MRJP5的特征肽段：YLDYDFGSDER，

中蜂蜜MRJP5的特征肽段：NLANSMNVIHEWK。

本发明根据意蜂蜜和中蜂蜜酶解产物的纳升级高效液相色谱液相色谱串联质谱检测结果，成功筛选出意蜂蜜特征肽段：YLDYDFGSDER，中蜂蜜特征肽段：NLANSMNVIHEWK，两者特异性通过Uniprot数据库进行了验证。

进一步，意蜂蜜的MRJP5的特征肽段YLDYDFGSDER在质谱中所产生的检测信号的母离子具有690.29114的质荷比，包含质荷比为1103.42761、710.31039的子离子。

中蜂蜜的MRJP5的特征肽段NLANSMNVIHEWK在质谱中所产生的检测信号的母离子具有519.26104的质荷比，包含质荷比为712.37769、599.29362的子离子。