[发明专利]一种双人源化肿瘤异种移植模型的构建方法

说明书

本发明提供一种双人源化肿瘤异种移植模型的构建方法，属于生物技术领域，包括：S1：获取单核细胞；S2：制备5*10⁵cells/mL的CD34+HSC细胞液；S3：NSG小鼠免疫模型的构建；S4：获得双人源化肿瘤异种移植模型。本发明提供的双人源化肿瘤异种移植模型的构建方法，采用hCD34+的脐带血造血干细胞作为免疫重建血液来源，GvHD反应小，动物存活时间长；筛选PDTX样本的标准具有生长速度快，生长大小均一的优点，具备和临床肿瘤组织学特性基本一致性的特点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种双人源化肿瘤异种移植模型的构建方法。

背景技术

癌症也称之为恶性肿瘤，是世界性的防治难题，并且近二十年来我国的恶性肿瘤发病率呈逐年上升趋势，目前肿瘤的主要治疗手段有手术、全身化疗、放疗、分子靶向治疗以及免疫治疗，其中肿瘤免疫治疗是继手术、放疗、化疗与分子靶向治疗后的一种新的能够改善肿瘤患者生存期的治疗方法，是一种通过重新启动并维持肿瘤-免疫循环，恢复机体正常的抗肿瘤免疫反应，从而控制与清除肿瘤的治疗方法。

自2011年FDA批准首个免疫检查点抑制剂ipilimumab应用于黑色素瘤治疗后,免疫制剂在临床上已用于非小细胞肺癌、肾癌、头颈鳞癌、霍奇金淋巴瘤、恶性黑色素瘤等的治疗,因此，肿瘤免疫治疗在肿瘤治疗中具有重要的研究意义和良好的应用前景。

免疫治疗在肿瘤治疗中显示出较高的抗肿瘤活性并提高生存率，但是持久的免疫反应只发生在一小部分患者中，免疫疗法需要一个功能正常的人体免疫系统的支持。基因改良的免疫缺陷小鼠PDTX模型是目前临床疗效的一线辅助评价工具，但由于其生物学和免疫学方面不符合人体微环境，具有显著免疫缺陷，因此在目前的免疫治疗背景下，它不适用于临床；另外，现有的人源化小鼠模型，其CD34+hsc细胞及接种到小鼠体内的样本，多为体外培养扩增。

因此，急需一种能够提供改良的人源化小鼠模型的双人源化肿瘤异种移植模型的构建方法。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明提供了一种双人源化肿瘤异种移植模型的构建方法，根据该方法获得改良的人源化小鼠模型，并将改良的人源化小鼠模型与完整肿瘤组织的人源异种移植模型(PDTX)相结合建成的双人源化小鼠模型性。

本发明提供了如下的技术方案：

一种双人源化肿瘤异种移植模型的构建方法，包括：

S1：获取单核细胞：

取新鲜脐带血，从所述新鲜脐带血中分离得到单核细胞；

S2：制备5*10⁵cells/mL的CD34+HSC细胞液：

将所述单核细胞通过CD34+微珠试剂盒分离得到CD34+HSC细胞液，将所述CD34+HSC细胞液调整至浓度为5*10⁵cells/mL，然后将所述5*10⁵cells/mL的CD34+HSC细胞液保存至注射；

S3：NSG小鼠免疫模型的构建：

取3周龄且做过清髓处理的NSG小鼠，通过尾静脉注射所述5*10⁵cells/mL的CD34+HSC细胞液，然后在尾静脉注射后的第4周开始每隔两周对NSG小鼠进行免疫学指标检测，当NSG小鼠血液中的h CD45大于或等于25％，得到NSG小鼠免疫模型；

S4：获得双人源化肿瘤异种移植模型：

取复苏成功的样本，在小鼠身上进行传代，将传至P5代且肿瘤生长速度稳定的样本接种至所述NSG小鼠免疫模型内，得到双人源化肿瘤异种移植模型。