[发明专利]一种百合水培籽球繁育方法

权利要求书

1.一种百合水培籽球繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)培养基培育：心叶预培养培养基：MS或MS+6-BA 1.0mg/[L(单位下同)+NAA 1.0；

丛芽诱导培养基：MS+6-BA 0.5+NAA 0.2～0.5,MS+6-BA 1.0+NAA 0.2～1.0,MS+6-BA2.0+NAA 0.2～0.5；

增殖培养基：MS+6-BA 3.0+NAA 02；

生根培养基：MS+NAA 0.5；

心叶预培养培养基、丛芽诱导培养基、增殖培养基及生根培养基均添加0.5％琼脂和3％蔗糖,pH 6.0，培养温度(25+2)C,日光灯光源,光照时间16h/d,光照强度2000～3000lx。

2)无菌材料的获取：于秋季百合地上部分枯萎时，采收鳞茎后覆盖湿沙藏于4C冰柜，取周径16cm以上的鳞茎,用自来水洗去外层和中层鳞片，保留较薄的内层鳞片(3～4层)及包裹的心叶，用洗涤剂浸泡并轻轻刷洗，蒸馏水冲洗3次，在超净工作台上用70％酒精浸泡1min,再用0.1％HgCl2消毒12min,无菌水冲洗6～8次，用镊子将内层鳞片与心叶分离将内层鳞片切成1.5cm2小块平放于丛芽诱导培养基中；

将心叶一片一片剥离接于心叶预培养培养基中预培养，可平放也可立插在心叶预培养培养基上；

3)心叶预培养：由于包于鳞茎中的心叶叶柄很短,经过预培养10d后,心叶及其叶脉由黄白色转为绿色，随着心叶展开，叶脉下部延长增粗，把此部位作为心叶叶柄取材，另叶脉中部与尖部也取材作对照。将叶柄及叶脉中上部横切成1～2mm的薄片平放接于丛芽诱导培养基中，薄片略呈半圆形；

4)芽诱导：内层鳞片培养15d后，鳞片转绿，部分鳞片切口处略外翻，呈现淡绿色疏松颗粒状愈伤，另有部分鳞片伤口处不反卷而呈现淡黄绿色愈伤，约35d后，可见分化出芽，分化率14％，叶柄切成薄片接于培养基后经12d左右，薄片略膨大并轻微扭曲，上表面出现黄绿色或淡黄色颗粒状致密的愈伤，约20d后即见白色晶体状小突起，仔细观察系一高一低相扣的小叶，10d后分化出白色籽球；

另外一种分化方式是浅绿色愈伤面上出现尖端略钝呈紫红色的突起，突起继续生长，30d即可分化出小叶条，边缘出芽略多，籽球逐渐转绿，叶片展出，分化率90％，每块外植体平均出芽7～10个，叶柄薄片的分化能力自基部向叶尖逐渐下降，直径8mm的薄片基本未见分化。

5)增殖培养：待籽球完全长出，将其从母体上切下并移入增殖培养基中培养，35d左右，籽球基部又可分化出2-4个芽，试管苗的叶柄基部再生分化67d后可出芽，增殖系数为2.5。

6)生根培育：将高约4cm的单芽接于生根培养基，20d可长出根，45d根长可达2cm左右，粗壮且具较多白色根毛。

7)水培基底的建立：取水培容器加入100ml蒸馏水，加入营养液，且营养液成分为氮磷钾混合剂，n:p:k＝1:0.8:1。

8)籽球移栽：移植前，打开增殖培养基炼苗3d，洗去附着的培养基基质，将籽球移植入水培容器中。

9)籽球培养：室温20-30℃，2天更换一次培养液，室温15-20℃，3天更换一次培养液，光照6h/d。