[发明专利]一种百合水培籽球繁育方法

说明书

本发明公开了一种百合水培籽球繁育方法，培养基培育：心叶预培养培养基：MS或MS+6‑BA 1.0mg/[L(单位下同)+NAA 1.0，丛芽诱导培养基：MS+6‑BA 0.5+NAA 0.2～0.5,MS+6‑BA 1.0+NAA 0.2～1.0,MS+6‑BA 2.0+NAA 0.2～0.5，增殖培养基：MS+6‑BA 3.0+NAA 02，生根培养基：MS+NAA 0.5，心叶预培养培养基、丛芽诱导培养基、增殖培养基及生根培养基均添加0.5％琼脂和3％蔗糖,pH6.0，培养温度(25+2)C,日光灯光源,光照时间16h/d,光照强度2000～3000lx。本发明心叶取材作为外植体，不仅材料本身带菌较少,且由于有内层鳞片包裹，可使心叶在灭菌过程中受到一定保护，灭菌效果较好，脱分化相对较快，为百合籽球水培繁育提供了合理的方案。

技术领域

本发明涉及百合培养技术领域，尤其涉及一种百合水培籽球繁育方法。

背景技术

百合，学名(Lilium brownii var.viridulum Baker)又名强蜀、番韭、山丹、倒仙、重迈、中庭、摩罗、重箱、中逢花、百合蒜、大师傅蒜、蒜脑薯、夜合花等，是百合科百合属(学名：Lilium)多年生草本球根植物，原产于中国，主要分布在亚洲东部、欧洲、北美洲等北半球温带地区，全球已发现有至少120个品种，其中55种产于中国。近年更有不少经过人工杂交而产生的新品种，如亚洲百合、香水百合、火百合等。鳞茎含丰富淀粉，可食，亦作药用，百合在培育过程中需要进行籽球繁育。

现有的百合培育过程中采用的外层和中层鳞片灭菌十分困难，外植体污染率极高，即使留下部分未污染的鳞片，不久后也褐化死亡，百合籽球成活率低，为此，我们提出一种百合水培籽球繁育方法来解决上述问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中百合培育过程中采用的外层和中层鳞片灭菌十分困难，外植体污染率极高，即使留下部分未污染的鳞片，不久后也褐化死亡，百合籽球成活率低的问题，而提出的一种百合水培籽球繁育方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

一种百合水培籽球繁育方法，包括以下步骤：

1)培养基培育：心叶预培养培养基：MS或MS+6-BA 1.0mg/[L(单位下同)+NAA 1.0；

丛芽诱导培养基：MS+6-BA 0.5+NAA 0.2～0.5,MS+6-BA 1.0+ NAA 0.2～1.0,MS+6-BA 2.0+NAA 0.2～0.5；

增殖培养基：MS+6-BA 3.0+NAA 02；

生根培养基：MS+NAA 0.5；

心叶预培养培养基、丛芽诱导培养基、增殖培养基及生根培养基均添加0.5％琼脂和3％蔗糖,pH 6.0，培养温度(25+2)C,日光灯光源, 光照时间16h/d,光照强度2000～3000lx。

2)无菌材料的获取：于秋季百合地上部分枯萎时，采收鳞茎后覆盖湿沙藏于4C冰柜，取周径16cm以上的鳞茎,用自来水洗去外层和中层鳞片，保留较薄的内层鳞片(3～4层)及包裹的心叶，用洗涤剂浸泡并轻轻刷洗，蒸馏水冲洗3次，在超净工作台上用70％酒精浸泡 1min,再用0.1％HgCl2消毒12min,无菌水冲洗6～8次，用镊子将内层鳞片与心叶分离将内层鳞片切成1.5cm2小块平放于丛芽诱导培养基中；

将心叶一片一片剥离接于心叶预培养培养基中预培养，可平放也可立插在心叶预培养培养基上；

3)心叶预培养：由于包于鳞茎中的心叶叶柄很短,经过预培养 10d后,心叶及其叶脉由黄白色转为绿色，随着心叶展开，叶脉下部延长增粗，把此部位作为心叶叶柄取材，另叶脉中部与尖部也取材作对照。将叶柄及叶脉中上部横切成1～2mm的薄片平放接于丛芽诱导培养基中，薄片略呈半圆形；