[发明专利]一种自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针及其制备方法

权利要求书

1.一种自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针，其特征在于，该探针为一种Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au-PNA/MCH/DNA纳米CYP2C9*3基因探针；该探针可检测浓度的线性范围为1 pM - 1µM，峰值电流范围为55-89 µA，检测限为0.95 pM（S/N = 3），定量限为3.18 pM（S/N = 10）。

2.根据权利要求1所述的自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针，其特征在于：所述探针PNA序列为5’-SH-(CH₂)₆-GAGATACCTTGACC-3’；靶DNA序列为5’-GGTCAAGGTATCTC-3’。

3.权利要求1或2所述自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将10 µL Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au纳米复合物悬浊液滴加至磁性玻碳电极表面，待液体干燥后，电极表面形成一层均匀的Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au膜；

（2）将5 µL包含三（2-羧乙基）膦的巯基修饰的PNA水溶液滴加至电极表面，4^oC孵育12h；

（3）使用3 µL，浓度为1 mM 6-巯基己醇封闭电极表面非特异性位点，阻止非特异性吸附。

4.根据权利要求3所述的自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针的制备方法，其特征在于，所述Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au纳米复合物由Fe₃O₄/Fe₂O₃异质体纳米棒和氯金酸制备得到，其中Fe₃O₄/Fe₂O₃异质体纳米棒的制备方法如下：

将5.40 g FeCl₃·6H₂O溶解于200 mL双蒸水中，90^oC静置搅拌2 h；

反应结束后，将悬浊液离心，所得沉淀水洗3次，无水乙醇洗2 次；

将沉淀分散于50 mL无水乙醇并转移至坩埚中，点火；待火焰熄灭后，将坩埚转移至程序控温炉中，300^oC煅烧2 h，得到Fe₃O₄/Fe₂O₃异质体纳米棒。

5.根据权利要求4所述的自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针的制备方法，其特征在于，所述Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au纳米复合物的制备方法如下：

a、将190 mL，浓度为4 mM的柠檬酸三钠溶液置于三颈烧瓶中，在磁力搅拌及回流条件下加热至沸腾；

b、将10 mg Fe₃O₄/Fe₂O₃异质体纳米棒超声分散于1 mL双蒸水中并滴加至沸腾的柠檬酸三钠溶液中；

c、反应5 min后，滴加10 mL，浓度为10 mM氯金酸溶液，反应至溶液变为紫红色；将溶液离心，并将沉淀物水洗五次，干燥，即得Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au纳米复合物。

6.根据权利要求3所述的自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au纳米复合物悬浊液的浓度为5-25 mg/mL。