[发明专利]一种自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针及其制备方法

说明书

本发明提供一种自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针及其制备方法。该探针为一种Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au‑PNA/MCH/DNA纳米CYP2C9*3基因探针；该探针可检测浓度的线性范围为1 pM‑1µM，峰值电流范围为55‑89µA，检测限为0.95 pM（S/N=3），定量限为3.18 pM（S/N=10）。本发明制备的纳米DNA探针操作简单、快速、特异性强，检测周期短，所需设备价格低廉，应用性强。

技术领域

本发明涉及一种自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针及其制备方法，属于生物分析技术领域。

背景技术

自2011年美国医学界提出“精准医学”的概念以来，基因检测受到了高度关注。单纯的通过年龄、性别和健康状况等角度出发进行所谓的“个体化用药”已远远不能满足医学需求。遗传因素是导致用药个体化差异的源头，以医疗诊断与基因组学为依据进行“量体裁衣”的用药方式成为新的医疗模式，具有更高的科学性。而精准临床诊断、预防与治疗的关键就是选择精准的分子标记物。

细胞色素P450（CYP450）是参加药物代谢的重要酶类，其表达和功能的遗传差异导致药物和营养吸收、清除的不同。在CYP450的众多亚型中，CYP2C9是第二亚家族的重要成员，占肝脏微粒体CYP450总量的20%。许多临床药物需要CYP2C9代谢，但CYP2C9基因存在多种类型的单碱基突变。其中除野生型CYP2C9*1外，CYP2C9*3基因型是主要基因型，可以影响多种药物的维持剂量。

临床上已开展了CYP2C9*3的基因检测项目，但由于定价相对偏高，应用受到很大限制。传统的基因检测手段耗时长、成本高、检测限高、需要昂贵的仪器。因此，推出一种快速、准确、价格低廉的新型检测手段成为单核苷酸多态性（SNP）检测的迫切需要。

发明内容

为克服现有SNP检测技术手段的缺陷，本发明提供了一种自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针。

本发明另一目的是提供上述探针的制备方法。

本发明还提供上述探针的应用。

本发明的具体技术方案如下：

一种自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针，该探针为一种Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au-PNA/MCH/DNA纳米CYP2C9*3基因探针；该探针可检测浓度的线性范围为1 pM - 1 µM，峰值电流范围为55-89 µA，检测限为0.95 pM（S/N = 3），定量限为3.18 pM（S/N = 10）。

进一步地，所述探针PNA序列为5’-SH-(CH₂)₆-GAGATACCTTGACC-3’；靶DNA序列为5’-GGTCAAGGTATCTC-3’。

上述自组装免标记磁性纳米CYP2C9*3基因探针的制备方法，包括以下步骤：

（1）将10 µL Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au纳米复合物悬浊液滴加至磁性玻碳电极表面，待液体干燥后，电极表面形成一层均匀的Fe₃O₄/Fe₂O₃@Au膜；

（2）将5 µL包含三（2-羧乙基）膦的巯基修饰的PNA水溶液滴加至电极表面，4^oC孵育12h；

（3）使用3 µL，浓度为1 mM 6-巯基己醇封闭电极表面非特异性位点，阻止非特异性吸附。